179353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás akuleacin-AÓ-Aš, -DÓ és-Dš antibiotikum előállítására
3 179353 4 30-75 fi, általában 40-60 fi. A szterigma egysorosnak tűnik, mérete 6—8 x 3-4 fi, közel egy sorban. A spóra általában gömb alakú vagy ellipszis alakú, változatos formájú, mérete 3,5—5,0 x 3,0—3,5 fi, világossárgásbarna színű és a fal egyenetlen. C. Tenyésztési körülmények. A tenyésztés hőmérséklete 13—40°C, pH-értéke: 2— 9. Az optimális tenyésztési hőmérséklet 29-31- °C, és a pH 3-5. A taxonómiai jellegzetességek alapján ez a törzs a sötétbarna spórákkal rendelkező Aspergillus niger csoporthoz tartozik [Japan. J. Agrical. Chem., 27, 806—809 (1953) és The genus Aspergillus 328—331 (1965)]. Ez a csoport'felosztható további két csoportra az egysoros és a gyűrű alakú szterigma alapján. Ez a törzs az egysoros csoportba tartozik. Jelenleg az egysoros szterigmát tartalmazó gombák közül az Aspergillus japonicus és az Aspergillus aculeatus ismeretes, és az Aspergillus japonicus spórái gömb alakúak vagy közel gömb alakúak és méretük 3— 3,5 fi, a hólyag mérete 15—45 n, általában 20—35 fi, és az Aspergillus aculeatus spórái gömb alakúak vagy ellipszis alakúak, és méretük 4,5— —5x3—3,5ß, a hólyag mérete 35-iOOju, általában 60-80 ju, ezért jelen törzs taxonómiai besorolása Aspergillus aculeatus. Az Aspergillus aculeatus ATCC 1034 törzs hasonlít a találmány szerinti törzshöz, így utóbbi megjelölése Aspergillus aculeatus M 4845 törzs. Ezt a törzset az Institute for Industrial Fermentation and Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Japán, intézménynél letétbe helyeztük és végleges deponálási száma FERM—P 4023. A törzset az United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Northern Utilization Research and Development Division intézménynél is letétbe helyeztük és a gyűjteményben végleges deponálási száma NRRL 11270. A találmány tárgya eljárás az új akuleacin-Aa, -A7, -Da és -Dy antibiotikumok előállítására, amelyek hatásosak patogén gombák és élesztők ellen. A találmányt részleteiben a következőkben ismertetjük. A leíráshoz fűzött 1—12. ábrák az új antibiotikumok jellemzőinek grafikus ábrázolása az alábbi részletezés szerint. 1. ábra Az akuleacin-Aa ultraibolya abszorpciós színképe metanolban, 2. ábra Az akuleacin-Aa infravörös abszorpciós spektruma, 3. ábra Az akuleadn-Aa aminosav összetétele, 4. ábra Az akuleacin-Ay ultraibolya abszorpciós színképe metanolban, 5. ábra Az akuleadn-A7 infravörös abszorpdós színképe, 6. ábra Az akuleacin-Aa aminosav összetétele, 7. ábra Az akuleadn-Dy ultraibolya abszorpciós színképe metanolban, 8. ábra Az akuleacin-Dy infravörös abszorpdós színképe, 9. ábra Az akuleacin-Dy aminosav összetétele, 10. ábra Az akuleacin-Da ultraibolya abszorpdós színképe metanolban, 11. ábra Az akuleadn-Da infravörös abszorpdós színképe, 12. ábra Az akuleacin-Da aminosav összetétele. Az akuleacin-csoportba tartozó antibiotikumok az akuleacin-Aa, -Ay, -Da és -Dy, és ezek az Aspergillus aculeatus M 4845 (NRRL 11270, illetve FERM—P 4023) mikroorganizmus tenyésztésével állíthatók elő, erős gombaellenes hatásuk van, ultraibolya abszorpdós színképükben 278 nm-nél csúcs van, és aminosav-komponensként treonint tartalmaznak. Az akuleacin-csoportba tartozó antibiotikumok peptid antibiotikumok. A találmány szerint az akuleacinokat úgy állítjuk elő, hogy az Aspergillus aculeatus M 4845 törzset megfelelő táptalajon tenyésztjük. A mikroorganizmus tenyésztését többféle módon végezhetjük, például folyékony vagy szilárd tenyészetben. Ipari célokra az Aspergillus aculeatus M 4845 törzs 1—2 napos tenyészetével vagy spóraszuszpenziójával beoltott merített, levegőztetett tenyésztés előnyös. Az akuleacinok előállításához alkalmas táptalaj asszimilálható szénfonást, például glükózt, nádcukrot, tejcukrot, malátacukrot, keményítőt, melaszt és glicerint tartalmazhat, asszimilálható szervetlen és szerves nitrogénforrásként kukoricalekvárt, szójalisztet, gyapotmagolajat, búzakorpát, húskivonatot, élesztőkivonatot, élesztőt, kazein hidrolizátumot, peptont és ammóniumsókat vagy nitrátokat tartalmazhat, továbbá sókat, például foszfátokat, magnéziumot, kaldumot, káliumot, nátriumot, cinket, vasat és mangánt. A tenyészet hőmérséklete az a hőmérséklettartomány, amelyben a mikroorganizmusok fejlődnek és akuleacint termelnek, előnyösen 25-28 °C. A tenyészidő általában 70—90 óra és ha a táptalajban az antibiotikum maximálisan feldúsul, akkor a tenyésztést befejezzük. A tenyészetben az akuleacinok a micéliumban és részben a micélium felületén dúsulnak fel. Az akuleacinok kimutatása tölcséres kimutatási módszerrel vagy papírkorongon történhet Candida albicans vagy Trichophyton asteroides használatával. Az akuleacinokat előnyösen és hatékonyan a micáiumból különíthetjük el. Az egyik előnyös eljárás szerint a fermentléből az akuleacinokat tartalmazó micéliumot dobszűrőn, szűrőprésen vagy centrifuga szeparátorral különítjük el. Az így kapott nedves micéliumot vízzel elegyedő szerves oldószerrel, például alkohollal és acetonnal extraháljuk, a kivonatból az oldószert desztilládóval eltávolítjuk, a maradékot vízzel hígítjuk, majd n-butanollal vagy etilacetáttal extraháljuk, a kivonatot vízzel moss de és csökkentett nyomáson bepárolva olajos anyagot kapunk. A kapott olajos anyagot adszorpdóval vagy frakcionált kromatografál ássál például aktív alumíniumoxidon, kova savgélen stb. tisztíthatjuk, a kapott aktív frakdót bepároljuk és így egy port kapunk, ami vékonyréteg-kromatografálással különböző kifejlesztőszerekkel egyetlen foltot mutat. Az akuleacinok fizikai-kémiai tulajdonságai a következők: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
