179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 gyantaágyat icmnentes vizzel mossuk, majd a megkötött sziszomícint az 1. példában leírt módon le oldjuk, a gyantáról és ammóniunformáju Aniberlite CG-JjO-I gyantán kronatográfáivá tisztítjuk, így 3,1 s sziszomicin bázist kapunk. 5« példa Micromonospora danubiens is /MNG 171/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú^ 580 ,ug/ml biológiai aktivitású fermentlé pH-ját Oá %-os ammoniumhldxoxid-oIdáttál keverés közben 9,5-re állítjuk be, majd hozzáadagolunk 500 g ammóniumszulíátot. Azután a lúgos fermentlét 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt micéliumot 3,5 liter vízzel mossu k, ma j d a tea. pott 11,5 liter egyesitett szűr let aez addig adagolunk ammóniun-oxalátót, amíg a kalcium-ionok teljes leválasztását el még 15 percig keverjük a lúgos oldatot, majd nem nsután n kéne avval a pH-ját 7-£s állítjuk. À kivált csapadékot leszűrjük, 50O ml vízzel mossuk. így 12 liter 2p0 /U;/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt I50 ml semlegesre moabtt ammón iuia-f or májú V/ofatit CP-300 ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon kötjük meg a 2. példában leírtak szerint. A továbbiakban is a 2. példa szerint járunk el, s igy 2,05 g sziszomicin bázist kapunk. S.példa A Mi cr onion os nor a rosea /ÓIG 182/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú, 400 ,ug/ml biológiai aktivitású fermentlevet az 1. példában ismertetett módon feldolgozzuk. A kalcium-mentesitett szürletet Varion KGO kát ioncserélő gyantaoszlopon folyatjuk át, majd a gyantán megkötött szisz órai cint leolaás után Amberlite CG-50-I kationcserélő gyantaoszlopon tisztítjuk. A tisztítás során kapott, sziszomicint tartalmazó frakciókat egyesitjük, majd a sziszomicin oldathoz 15,6 S 4,4*-metilén-bisz-/3- -hidroxi-2-naftoesav/ /ponoinssv/ 67,6 ml 1 n nátrium-hidroxiddal készített oldatát adagoljuk szobahőmérsékleten kevertetés közben. Ezután a kapott oldat pH-ját 5 n kensav-oldattal, 5,5-6- os értékre állítjuk be. Az igy nyert csapadékos oldatot 30 percig keverjük, majd a csapadékot az oldatból kiszűrjük. A csapadékot desztillált vizzel alaposan mossuk, majd 100 ml desztillált vízben szuszpendáljuk. A szuszpenzió plí-ját kevertetés közben 5 n kénsav oldattal 2-es értékre állitjuk be. A szuszpenzi-' ót 1 órán át keverjük, majd a visszamaradt csapadékot kiszűrjük. Ezután a csapadékot 100 ml desztillált vízben szuszpendáljuk, majd pH-2-es értéken 1 órán át keverjük. A visszamaradt pamoinsavat" kiszűr jük, majd az egyesitett, sziszomicint tartalmazó szürlethez kevertetés közben hidroxil-formáju Amberlite ISA 401 S ioncserélő gyantát adva, a szűr let pH—ját 4,3-^e állitjuk. Ezután az ioncserélő gyantát kiszűrjük és desztillált vizzel mossuk. A szürletet és a mosófolyadékot egyesitjük, majd vákuumban 30-40 C°-on 20 ml térfogatra bepároljuk. Az oldathoz 0,2 g aktiv szenet adunk és az oldatot 30 percen át keverjük, majd Seitz-lapon leszűrjük. A szűrőt desztillált vizzel mossuk, majd az egyesitett szürletet kevertetés közben 10-sseres mennyiségű metanolba öntjük. A keletkező csapadékos oldatot 5 0°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük. A kapott sziszonicin-szulíátot^metanollal mossuk, majd vákuumban 50 G -on s uly állan dós ág iç szárítjuk foszforpentoxid felett. így 2,6 g sziszomicin-szuífátot kapunk. 8
