179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 micint és az eluátum bepárlásával jutnak a nyers sziszomicinhez. Ezt először Dovex-lx2 anioncserélő oszlopon tisztítják, majd kénsavval szulíátsóvá alakítják. Az utóbbit cellulóz oszlopon klór oform-metanol-ammóni umhidr oxid-eleggyel krómat ografálj ák, hogy a sziszomicint a kis érő antibiotikumoktól elválasszák. Végül IBA 401S anioncserélő gyantán tisztítják meg teljesen a sziszomicint • A fenti elválasztási eljárás során a mi leró or g an izmus sejtjeinek szűrését savas pH-n végzik. Minthogy a sziszomicin erősen kötődik a mikroorganizmus sejtjeihez, a savas körülmények között végzett szűrés során jelentős hatóanyag-veszteség lép fel. Az ismertetett eljárás szerint a nyers termék tisztítása is anyagvesztëséggel és költségesen valósítható meg. A tisztítás első lépésében alkalmazott anioncserélő kromatográfia nem alkalmas a sziszomicin mellett keletkező rokonszerkezetü bázikus antibiotikunok és bioszintézis termékek elválasztására, mert az anioncserélő gyanta elsősorban a savas jellegű szennyeződéseket köti meg. Cellulóz-oszlopon kloroform-metanol-ammónium-hidroxid elegy- ** gyei krómatográfáivá a sziszomicint kisérő antibiotikumok elkülöníthetők, de az eljárás a nagy mennyiségű szerves oldószer alkalmazása miatt költséges és technikailag nehezen kivitelezhető. Hasonló hátrányokat mutat az előző szabadalmi leírásokban ismertetett, másik eljárás-változat is, mely szerint a sziszomicin bázist a kis érő antibiotikumoktól kovasavgél-oszlopon kloroforra-izopropanol-ammóniüm-hidroxid-eleggyel krómatográfáivá választják el. A 3 951 7^6 számú Amerikai Egyesült ÁHamok-beli szabadalmi leirás szerint a Micromonospora grisea /ITIÏHL 3800/ törzzsel verdamicin I-et, sziszomicint, gentamicin A-t és G 418-jelü antibiotikumot , tartalmazó komplexet állítanak elő. A 3 956 068 számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban pedig G 52-jelü antibiotikumot és sziszomicint tartalmazó antibiotikum komplex Micromonospora zionensis /NEKL 5466/ törzzsel történő előállítását ismertetik. Ezekben az eljárásokban az antibiotikum-komplexek izolálására és a kompenensek elkülönitésére a fent Ismertetett eljáráshoz hasonló módszereket alkalmaznak. Ezek a szabadalmi eljárások tehát nem jelentenek előrehaladást a sziszomicin előállítása szempontjából, értékük inkább abban jelentkezik, hogy uj aminoglükozid antibiotikumok /verdamicin I, G 418-jelü antibiotikum, G 52-jelü antibiotikum/ előállítását teszik lehetővé. A 168 778 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetik, hogy a Micromonospora purpurea var. nigrescens /MNG 122/ törzs gentamicin-komplex mellett sziszomicint is termel. Az izolálási eljárás során a mikroorganizmus sejtjeit a gentamicin kinyerése szempontjából kedvező, savas közegben /p.H=2/ szűrik le. Ezt követően a kalcium-ionokát oxalát—formában leválasztják. A kalcium—oxalát leszűrése után a szürletből az antibiotikum-komplexet 7/ofatit CP 300-as kationcserélő gyantán kötik meg, majd a gyantaoszlopról kénsavval oldják le, és az eluátumból metanollal szulfátsó formájában kicsapják. Az igy kapott nyers terméket ammóniumhidroxiddal bázissá alakítják^ majd Amberlite CG—50-II kationcserélő gyantán növekvő molaritasu ammonium—hidroxiddal krómatográfáivá a gentamicin-komplex komponenseit a sziszomicintől elkülönítik. Végül a sziszomicint tartalmazó frakciót GM Se— fadex C-25 dextrán-gélen krómatográfáivá jutnak tiszta sziszomicinhez. 2
