179013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-35512 antibiotikum-keverék előállítására

15

179013

16

Az A—35 512 antibiotikum keverék A, B, C, E és H, továbbá a minor komponensként jelenlevő F és G jelű összetevőit papírkromatográfiás eljárással, oldószerként 1-butanol : piridin : ecetsav : víz 15 : 10 : 3 :12 arányú elegyét használva, választjuk 5 el. Bioautográfiás vizsgálatnál Sarcina lutes tesztorganizmust használunk. Az A—35 512 komponensek Rf-értékei ebben az oldószerelegyben az 1. táblázatban megadottak.

1. táblázat

A—35 512 komponens

Rf-érték

15

A ’2HC1 komponens

0,21

B -2HC1 komponens

0,34

C "2HC1 komponens

0,46

E • HC1 komponens

0,64

20

F komponens

0,81

G komponens

0,93

H *HC1 komponens

0,15

Különböző kromatográfiás oldószerelegyekkel vizsgálva az A—35 512 H komponens kromatográfiás képe igen hasonlít az AM374 antibiotikuméhoz (3 700 768 számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás). Az A-35 512 H komponens megkülönböztet- 30 hető az AM374 antibiotikumtól legalább két papírkromatográfiás rendszerben. Ezekkel az oldószerelegyekkel vizsgálva az A—35 512 H komponens dihidrogénklorid sójának és az AM374 antibiotikumnak Rf-értékeit a 2. táblázatban adjuk meg. 35

2. táblázat------------------------------------------------------------------- 40

Rf-érték

Oldószerelegy A—35 512 H AM374

CH3OH : 0,1 N HC1 (3 : 1) 0,47 0,58 45

1-propanol : NH4 OH : H2O 0,11 0,20

(6:3:1)

Az A-35 512 antibiotikum-keverék több kompo- 50 nensét hatékonyan elkülöníthetjük nagynyomású folyadékkromatográfiával (HPLC), stacioner fázisként poliamidot (Z1PAX, DuPont), míg mobil fázisként 1,33 mólos vizes káliumdihidrogénfoszfát oldatot használva, a detektálást 250 nm hullámhosszúságú 55 ultraibolya fénnyel végezzük. A 3. táblázatban megadjuk az ilyen módon elkülönített A—35 512 komponensek retenciós idejét, a kromatográfiát a következő körülmények között végezzük:

60

Oszlopnagyság: 12x6 cm.

Töltet: poliamid (Z1PAX, DuPont).

Oldószer: KH2P04 (327 g) (H20/1800 ml).

Átfolyási sebesség: 0,5 ml/perc.

Nyomás: 116 atü.

3. táblázat

A—35 512 komponens

Retenciós idő (perc)

A

9,375

B

13,125

C

26,25

E

5,625

F

7,5

G

7,5

H

7,5

A találmány szerinti eljárással előállított A—35 512 B komponens aglikonjának hidrogénklorid sója egy fehér színű, amorf anyag, amelynek a következő a közelítő százalékos alapösszetétele:

szén: 54,29%, hidrogén: 4,34%,

nitrogén: 7,40%, klór: 5,02%,

oxigén: 28,95% (a különbség alapján).

Az A-35 512 B komponens aglikonjának (hidrogénklorid só) infravörös abszorpciós spektrumát a mellékelt 6. ábrán adjuk meg. Legjellemzőbb elnyelési maximumokat a következő frekvenciákon (cm-1) találjuk: 3 440 (vállas), 3 340 (vállas), 3 215 (erős), 2 950 (vállas), 2 910 (erős), 2 840 (erős), 2 640 (vállas), 1 735 (gyenge), 1 655 (erős), 1 590 (közepes), 1 500 (erős), 1 460 (erős), 1 378 (közepes), 1 365 (vállas), 1 298 (közepes), 1 215 (közepes), 1 155 (közepes), 1 120 (vállas), 1 105 (gyenge), 1 060 (gyenge), 1 040 (gyenge), 1 008 (közepes), 925 (gyenge), 875 (gyenge), 765 (vállas) és 718 (gyenge).

Az A-35 512 B ágiikon hidrogénklorid sójának 66%-os vizes dimetilformamidban végzett elektrometrikus titrálása szerint a vegyületben három titrálható csoport van, amelyeket a következő pKa-értékekkel jellemezhetünk: 7,5, 9,25 és 11,0, ezen felül két további 11,0-nél nagyobb pKa-értékkel jellemezhető csoport lehet jelen.

Az A—35 512 B komponens ágiikon hidrogénklorid sójának molekulasúlya a titrálás adatai szerint körülbelül 1 282.

Az A—35 512 B ágiikon hidrogénklorid sója az alábbi fajlagos forgatással rendelkezik:

[a]pS: -178° (konc.: 5, metanol) fajig s : -716,8° (konc.: 5, metanol).

Az A-35 512 B ágiikon hidrogénklorid sójának ultraibolya abszorpciós spektrumában savas és neutrális metanolban végezve a mérést 282 nm hullámhosszon (E}%m: 102,62) és bázikus metanolban 302 nm hullámhosszon (E}%m : 182,09) látszik elnyelési maximum.

Az A-35 512 B ágiikon dimetilszulfoxid-d6-ban, 90 °C hőmérsékleten vizsgált C13 mâgnesçs magrezonancia spektrumában a következő jellemző pontokat találjuk:

8