179006. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rhinovírus ellen hatásos N-piridotienopirazolil- karbonsavamid- származékok előállítására
179006 Az 1., 2. vagy 3. példában leírt eljárással 1-metil(vagy 1 -etil)-l H-pirazolo[3’,4’:4,5j- tieno[2,3-b]piridin-3-aminból a következő (I) általános képletű vegyületeket állíthatjuk elő: 2. táblázat (I) általános képletű vegyidet 1 1 R, R2-ch3-CH2(CH2)3CH2C1-ch3-CH2(CH2)3CF3-ch3-CH2(CH2)4CH3-ch3-CH2CH2CH2CH(CH3)2-ch2ch3-C(CH2CH3)3-ch2ch3 -chch2ch2ch2ch3 1 1 ch2ch3-ch3-CH(CH2CH2CH3)2 ch3 1-ch3-cch2ch2ch3 1 ) ch3-ch3-chchch2ch3 I \ CH3CH3 Vírus-ellenes tesztelés 30 A kereskedelemben még nem volt forgalomban rhinovírusos fertőzés kezelésére (azaz közönséges nátha kezelésére) alkalmas gyógyszerkészítmény, kivéve a tüneti kezelésre szolgáló gyógyszereket. A nátha megelőzése biológiai készítményekkel, például 35 vakcinákkal, nem praktikus, mert túl sok olyan rhinovirustörzs létezik, amely náthát okoz, jelenleg több mint 100 különböző antigén-típust ismerünk. A találmány szerint előállított vegyületek azonban in vitro széles hatásspektrumot mutatnak. Valójában 40 egy olyan törzset se találtunk, amely rezisztens lett volna. A 3. táblázat azoknak a rhínovírustörzseknek a listáját tartalmazza, amelyeket megvizsgáltunk és úgy találtuk, hogy a találmány szerint előállított vegyületekkel a vírusokat meg tudtuk gátolni45 működésükben. 3. táblázat Az N-(piridotienopirazolil)-amidokkal gátolt és 50 megvizsgált rhinovirus-típusok Típus Törzs 1A 2060 1B B632 2 HGP 3 FEB 5 Norman 13 353 14 1059 15 1734 39 209 41 56110 51 F01-4081 3. táblázat folytatása Típus Törzs Még nincs besorolva 998 Még nincs besorolva 1426 Még nincs besorolva 1492 Még nincs besorolva 1662 Még nincs besorolva 4006 Még nincs besorolva 6579 Az egyes fertőzéseket a szakember számára ismert kikészítési formákban orálisan vagy intranazalisan kezelhetjük, azonban előnyös az orális kezelési mód. Az orális dózis tabletták vagy kapszulák alkalmazása esetén 2—50 mg/kg/dózis között változik. Az adagolás olyan gyakorisággal történik, hogy minden 4 órában adjuk vagy pedig egyszer egy nap. Orális dózisformaként nyújtott hatású készítményeket is használhatunk. Az intranazális adagolási mód magába foglalja az intranazális cseppeket inhalálószer segítségével vagy alkalmas cseppecskéjű aeroszol formájában. A koncentráció 0,1 mg/ml és 20 mg/ml között változhat, előnyösen 0,1 és 2,0 mg/ml között van. Gwaltney [J. Gwaltney, J. 0. Hendley és P. Wenzel, N. Engl. J. Med., 288 1361 (1973)] kimutatta, hogy a legfontosabb módja a rhinovírus terjedésének az orr nyálkájának az érintése. Ha sterilizálnánk azoknak az embereknek a kezét, akik rhinovírussal fertőzött emberekkel vannak érintkezésben, akkor ezzel egy módszert találnánk a betegség további terjedésének megakadályozására. Ha az N-(piridotienopirazolil)-aminokat egy kézmosóba vagy kézkezelő eljárásba építenénk be, akkor megakadályozhatnánk a rhinovírus termelődését és a betegség továbbterjedését, illetve annak valószínűségén csökkenthetnénk. A szakember számára ismeretes a következő biológiai teszt-módszer: Fiala, M., Plaque Formation by 55 Rhinovírus Serotypes, Appl. Microbiol. 16 1445 (1968). Rhinovírus-érzékeny HeLa-sejteket egybefolyó egyréteggé növesztünk és körülbelül 100 rhinovírus-részecskével megfertőzünk, majd különböző koncentrációkban a teszt-vegyületet tartalmazó és agar-tartalmú médiummal fedjük. Három vagy négynapos inkubálási idő után 34 °C-on az agart eltávolítjuk és a lemezek kristályibolyára színeződnek. A gátlás mértékét a sejtrétegben lévő foltok számának csökkenéséből határozzuk meg, a minimális gátló készítmény a vegyületet olyan koncentrációban tartalmazza, amely a foltképződés teljes megakadályozásához szükséges. Az 1. példa szerint előállított 2,2-dietil-N-(l-metil-lH-pirazolo[3’,4’:4,5]tieno- [2,3-b]piridin-3-il)-butánsavamidot 2 mikronra vagy még ennél is kisebb részecskenagyságra mikronizáljuk és desztillált vízben szuszpendáljuk, több részletben, 50 pg/ml - 0,4 qg/ml hígítási sorozatban. A kapott eredményeket három rhinovírus törzs esetében a 4. táblázatban szemléltetjük. Ezek az eredmények azt 6
