178756. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiolvédőcsoportok eltávolítására aminosavakból és peptidekből
9 178756 10 30 ml dimetil-formamidban feloldunk 2,0 g fenti merkaptidot és H2 S-gázt vezetünk be az oldatba 80 percig. A képződött HgS-ot Celite-szűrőn átszűrve eltávolítjuk és a szíírletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kristályos maradékhoz vizet adunk, a kristályokat szűréssel összegyűjtjük és a metanolból és vízből átkristályosítjuk. Kitermelés: 1,1 g (100%), olvadáspont: 130-132 °C [a]“ = -5,7° (c = 0,57, dimetil-formamid). Berni analízis Cl6H2i06N3S képlet alapján: számított: C =50,12%, H = 5,52%, N = 10,96%, S =8,36%, talált: C =49,61%, H=5,18%, N = 10,97%, S =8,44%. tBu I 2. Z-Gly-Cys-Gly-OMe-ből: tBu j A Z—Gly—Cys—Gly—OMe vegyületet az 1. pont szerint kezelve merkaptidot és Z-Gly-Cys-Gly-OMe-t kapunk 84,2%, illetve 84,5% kitermeléssel. Az olvadáspont és az qq alapján e vegyület azonos az 1. pontban kapott vegyülettel. Berni analízis: számított: talált: C =50,12%, N = 10,96%, C =50,13%, N = 10,77%, H =5,52% S =8,36%, H =5,61%, S =8,27%. 3. példa bisz-terc-Butoxi-karbonil-L-cisztin előállítása 5 200 ml 80%-os vizes metanolban feloldunk PMB I 3,41 g Boc-Cys-OH-t és 5,12 g Hg(CF3COO)2 hozzáadása után az oldatot szobahőmérsékleten 10 2 óráig keverjük. 100 ml 80%-os vizes metanol hozzáadása után 30 percig H2 S-gázt vezetünk be a reakcióelegybe. A képződött HgS-ot leszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson eredeti térfogatának felére bepároljuk. A maradékhoz 4,2 g nát- 15 rium-hidrogén-karbonátot adunk és csökkentett nyomáson folytatjuk az elegy bepárlását. A metanol eltávolítása után a maradékhoz 100 ml vizet adunk és az oxidációt levegő 40 órán át való bevezetésével hajtjuk végre. Az elegyet citromsavval 20 megsavanyítjuk és a kapott olajat kétszer 150 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etü-acetátot ledesztilláljuk, a maradékot petroléter hozzáadásával kristályosítjuk és a kristályokat szűréssel összegyűjtjük, majd etil-acetátból átkristályosítjuk. 25 Kitermelés: 1,85 g, olvadáspont: 149—150 °C (bomlás). Elemi analízis C^H^OsN^ képlet alapján: számított: C = 43,62%, H = 6,48%, N = 6,36%, S = 14,55%, 30 talált: C =43,72%, H= 6,34%, N = 6,24%, S = 14,25%. 4. példa 35 Oxitocin előállítása 3. Az alábbi táblázat a Z—Gly—Cys— Gly—OMe kristályok kitermelését mutatja, melyeket Z—Gly- PMB I-Cys-Gly—OMe-ből állítottunk elő Hg(CF3COO)2- tal kezelve 80%-os ecetsavban. 20 ml 80%-os ecetsavban feloldunk 1 millimól PMB I £-Giy-Cys-Gly-OMe-t. hozzáadunk 512 mg (1,2 millimól) vagy 853 mg (2,0 millimól) Hg(CF3COO)2-t. Az elegyet szobahőmérsékleten 60 percig keverjük. 40 ml 80%-os ecetsav hozzáadása után 20 percig H2 S-gázt vezetünk be az elegybe. A HgS-ot leszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz Tizet adunk, a képződött kristályokat szűréssel összegyűjtjük és etil-acetátból átkristályosítjuk. Hg(CF3COO)2 1,2 mól- 2,0 mólekvivalens ekvivalens Kitermelés 83,9%, 76,5% 112 a fenti reakciót Hg(CF3COO)2 helyett >2 mólekvivalens Hg(CCl3COO)2-vel hajtjuk végre, a Z—Gly—Cys—Gly—OMe kitermelése 74,9%. 1. Boc-Cys(PMB)-Tyr-Glu-Asn-Cys(PMB)-Pro-Leu-Gly gyanta előállítása 40 Boc—Gly-gyanát (glicintartalom: 2,2 millimól) Shimadzu automatikus peptid-szintetizátor APS-800-ba helyezünk és egymás után a következő műveleteket hatjuk végre: 45 1. Mosás diklór-metánnal (3 x 2 perc) 2. 50% trifluor-ecetsav-diklór-metán (2 X 10 perc) 3. Mosás diklór-metánnal (3x2 perc) 4. Mosás etanollal (3x2 perc) 5. Mosás kloroformmal (3x2 perc) 50 6.10% trietil-amin-kloroform (1x2 perc, 1x10 perc) 7. Mosás kloroformmal (3x2 perc) 8. Kondenzációs reakció 6,6 millimól Boc-aminosav szimmetrikus anhidriddel (60 perc) vagy 55 6,6 millimól Boc-aminosav-p-nitro-fenil-észterrel ( 12 óra Boc-Asn, Boc-Glu vagy Boc-Tyr esetében). 9. Mosás diklór-metánnal (3x2 perc) 10. A nem reagált aminocsoport acetilezése (4,5% ecetsavanhidrid-diklór-metán) 60 11. Mosás diklór-metánnal (3x2 perc). E reakciók elvégzése után a terméket egymás után ecetsavanhidriddel, dimetil-formamiddal és metanollal mossuk és szárítjuk. 65 Kitermelés: 13,15 g. 5
