178756. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiolvédőcsoportok eltávolítására aminosavakból és peptidekből
11 178756 12 2. Boc—Cys(PMB)—Tyr—Ile —Glu—Asn-Cys(PMB)-Pro—Leu—Gly-NHî előállítása Az 1. pontban kapott-gyanta 12,6 g-ját 15,5% ammóniát tartalmazó 70 ml metanolban szuszpendáljuk és a szuszpenziói szobahőmérsékleten 46 óráig keverjük. A gyantát leszűrjük és kétszer 20 ml dimetil-formamiddal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz 50 ml étert adunk, a kapott port szűréssel összegyűjtjük és megszárítjuk. A terméket fonó metanolból, vizes etanolból és dimetil-formamid/etanolból való ismételt kicsapással tisztítjuk. Kitermelés: 1,0 g A fenti port 2,8 x 4,0 cm szilikagéloszlopon (oldószerrendszer: kloroform/metanol/víz-piridin/ecetsav 1085 :150 :25 : 63 : 84 kromatografáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk. Kitermelés: 768 mg. [ajo* =-39,1° (c = 0,47, dimetil-formamid). Elemi analízis • CH3COOH • •H20 képlet alapján: számitott: C = 55,52%, H =6,92%, N= 11,78% S =4,49%, talált: C = 55,24%, H = 7,00%, N = 11,92% S =4,43%. 3. Oxitocin előállítása Imi trifluor-ecetsavban 125 mg 2. pontban kapott port és 0,22 ml anizolt oldunk, majd 127 mg Hg(CH3COO)2-ot adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig állni hagyjuk. 30 ml éter hozzáadása után a kapott csapadékot szűréssel összegyütjük (173 mg). A csapadékot 0,31 ml 2-merkapto-etanol hozzáadása után 3 ml 50%-os vizes ecetsavban oldjuk és a csapadékot leszűrjük. \ szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 1 ml 50%-os vizes ecetsavban oldjuk és az oldatot Sephadex G-15 oszlopon bocsátjuk át 50%-os ecetsavat használva eluensként. A 149—188 ml közötti frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk (85 mg). A liofolizált anyagot feloldjuk 150 ml 0,1%-os vizes ecetsavban, az oldatot vizes ammóniaoldattal pH 7,3-ra állítjuk be, majd levegőt buborékoltatunk be az oldatba. 4,5 óra múlva az oldat pH-ját 3,5-re állítjuk be és liofílizáljuk (76 mg). A liofilizátumot a fent említett oszlopon kromatografáljuk. A 154—188 ml közötti frakciókat összegyűjtjük és liofilizálva 50 mg oxitocint kapunk. [Q]r>2 =-24,6° (c = 0,47, 1 n vizes ecetsavoldat). Aminosav-analízis : Asp 1,03, Glu 1,13, Pro 1,06, Gly 1,00, Cys 1,97, Ile 1,03, Leu 1,03, Tyr 0,90 vékonyrétegkromatográfia : Rf (n-butanol-ecetsav-víz 3:1 :1) = 0,44, Rf (n-butanol-etil-acetát-ecetsav-víz 1 :1 :1 :1) = 0,66 (mindkettő egyetlen folt). Szomatosztatin előállítása PMB I 1, H-Cys-OtBu • L-tartarát szintézise PMB I 4,82 g (0,02 mól) H-Cys-OH és 150 ml dioxán szuszpenziójához cseppenként, keverés közben, szobahőmérsékleten 4,8 ml tömény -kénsavat adunk. Az elegybe jeges hűtés közben 75 ml izobutilént vezetünk be. Az elegyet légmentesen lezárva szobahőmérsékleten 12 óráig állni hagyjuk. Az elegyet 300 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatra öntjük és háromszor éterrel extraháljuk. Az éteres réteget vízmentes nátrium-szulfát felett megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláltjuk. Az olajos maradékot 50 ml éterben oldjuk, majd 3 ml 6,69 n dioxános sósav-oldatot adunk hozzá. A kapott kristályokat szűréssel összegyűjtjük és etil-acetátból átkristályosítjuk. Kitermelés: 2,4 g A fenti kristályokból 1,99 g-ot éterben szuszpendálunk és 10 ml In nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. A keveréket addig rázzuk, amíg oldattá alakul és kétszer éterrel extraháljuk. Az éteres oldatokat egyesítjük, szárítjuk és csökkentett nyomáson desztilláljuk. Az olajos maradékot etanolban oldjuk. Az oldatban feloldunk 900 mg L-borkősavat és az oldatot rövid ideig állni hagyjuk. A képződött kristályokat szűréssel összegyűjtjük és kétszer etanolból átkristályosítjuk. Kitermelés: 2,3 g, olvadáspont: 100-102 °C. [a]p7 = —3,2° (c = 0,53, dimetil-formamid). Elemanalízis 5H2303NS • C4H606 • 1/2H20 képlet alapján: számított: C = 49,99%, H = 6,62%, N = 3,07%, S = 7,02%, talált: C = 49,85%, H = 6,74%, N = 2,98%, S = 6,68%. 2. Z—Thr—Ser—OMe szintézise 50 ml dimetil-formamidban feloldunk 6,22 g (0,04 mól) H—Ser—OMe • HCl-ot, majd jeges hűtés közben trietil-amint adunk hozzá. A képződött sót szűréssel eltávolítjuk és a szűrlethez 16,6 g (0,04 mól) Z-Thr-ONB-t adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 12 óráig keverjük, majd az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot etil-acetátban oldjuk, nátriumkloriddal telítjük és 1 n sósav-oldattal és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. Szárítás után az etil-acetátot le desztilláljuk és a képződött kristályokat összegyűjtjük. Kitermelés: 10,0 g (74,5%), olvadáspont 133—135 C. [a]p3 =+ 10,1“ (c = 0,86, dimetil-formamid). Elemi analízis Ci6H2207N2 képlet alapján: számított: C = 54,23%, H = 6,26%, N = 7,91%, 5. példa 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
