178380. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hármgyűrűs heterociklusos vegyületek előállítására
5 178380 6 roxilaiîJinnal vagy célszerűen ennek hidrogén-kloridjával reagáltatjuk. A reakciót célszerűen magasabb hőmérsékleten, és nátrium-acetát jelenlétében hajtjuk végre. Mint már fent említettük, az (I) általános képletű 5 vegyületek, valamint ezek savaddíciós sói érdekes farmakológiái .tulajdonságokkal rendelkeznek. Ezek a vegyületek jelentős antiallergiás hatást mutatnak. Ezeket a vegyületeket tehát asztma és allergiás eredetű tüdő-asztma kezelésére használhatjuk. 10 Az alábbi vizsgálatokkal a farmakológiai aktivitást mutatjuk be: Passzív cutan anaphilaxis (PCA) patkányokon: 15 Cutan anaphilaxist idézhetünk elő patkányokon úgy, hogy antiszérummal intradermálisan (ID) szenzibilizáljuk őket, majd ezt követően, három nap múlva antigénnel szisztémás kiváltást idézünk elő. Az anti- 20 génnel együtt Evans-kék festéket is injektálunk, a lokális válasz erősségének jelzésére. Ezt a reakciót az antiallergiás szerek csökkentik. Ezt a módszert Ovary írta le 1962-ben a „Passive cutaneous Anaphylaxis in Allergology” c. könyvben 358—367. oldal. (Brown: 25 Pergamon Press kiadás.) A kísérleti állatok 180—220 g hím patkányok voltak, hetes csoportokban. 30 Az antigén készítése a szenzibilizációhoz (Alumíniummal lecsapott tojásfehérje): 1. 120 g AL(OH)3 gélt kimosunk 140 ml sóoldattal. 2. 10 percig 3000/perc fordulattal centrifugáljuk. 35 3. A 300 ml tojás-albuminoldattal (1,3 mg/ml) kapott csapadékot sós vízben újra szuszpendáljuk és 30 percig állni hagyjuk. 4. A szuszpenziót 3000/perc fordulattal 10 percig centrifugáljuk. 40 5. A csapadékot lemérjük, és minden grammjához 1 ml sóoldatot adunk. Hűtőszekrényben tároljuk. (Az így készített mennyiség 60 patkányhoz elegendő, három napos szenzibilizációs programhoz.) Antiszérum készítése (azaz anti-tojás-albumin) 1. Alumíniummal lecsapott tojás-albuminból 1-1 ml-es szubkután injekciót adunk a 180—200 g súlyú 50 Patkányoknak a 0., 2. és 4. napon. 2. A patkányokat a 14. napon elvéreztetjük a szív vagy a hasi aorta dorzális punkciójával. 3. Mindegyik állatból azonos mennyiségű szérumot összeöntünk és alaposan összekeverjük. o 4. Az elegyből 2 ml alikvot részeket —20 C-on tárolunk műanyag csövekben. A szérum hígítása PCA-hoz A szenzibilizációhoz készített antiszérumot oly mértékben hígítjuk, hogy a kontroll állatokat adott ml ID injekció átlagosan 2 -3,5 pontot adjon egy 5 pontos (0,1, 2, 3 és 4) rendszerben • Módszer A) Szenzibilizáció: A patkányokat nembutálial elaltatjuk (40—60 mg/kg i.p.) és ezután négy ID injekcióval (0,1 ml egyenként) szenzibilizáljuk a leborotvált hátukon. Az állatokon kb. három nap múlva fejlődik ki a szenzibilizáció. B) Kiváltás: A szenzibilizált állatoknak orálisan vagy intravénásán adjuk be a vizsgálandó anyagot, közvetlenül az Evaus-kékkel kevert antigén 1 mM történő intravénás kiváltás előtt, a szuper&iális penis vénán keresztül. (1 mg poralakú tojás-albumin, 0,1 ml sóoldat és 0,5 ml 1%-os Evans-kék oldat.) Az injekciót 1 ml-es, öntöltő üveg injekciós fecskendő használatával adjuk be. Azokat a patkányokat, amelyeknél az allergiás sokkot kiváltottuk, 30 perc múlva elpusztítjuk (általában leszúrással) és a hátoldali bőrt eltávolítjuk. Az elszíneződés mértékét és felületét, ami az anaphyiaxiás reakcióval arányos, az 5 pontos rendszerrel mérjük. Értékelés : 1. Az 1, 2, 3 és 4 helyen teljes kiváltás=X 2. Minden csoportban X átlagértéke=X 3. Xt=x a vizsgálandó csoportoknál Xc=x a kontrollcsoportoknál Xc-Xt 4. %-os inhibíció=---------• 100 Xc 5. ED50=a vizsgálandó vegyületnek 50%-os inhibíciót előidéző dózisa. A vizsgált vegyületek 50%-os inhibiciót előidéző adagjait (EDjo) a passzív cutan anaphilaxisban (patkányoknál) a következő táblázatban adjuk meg. A példa, amelybe a vegyüleíet leírtuk ed50 mg/kg i. v. mg/kg p. o. 2 (hidroklorid) 0,16 0,068 3 (hidroklorid) 0,14 0,084 0,012 0,089 5 — 0,36 6 — 0,09 7 0,026 0,105 8 0,11 0,98 12 0,27 0,24 13 0,12 0,40 14 0,01 0,12 15 3,39 — 21 — 0,062 22 — 0,077 24 — 0,045 26 0,011 0,439 30-0,33 — táblázat szerint a leghatásosabb gyógyszerek azok, lyeket az előzőekben felsoroltunk, z (I) általános képletű vegyületek, illetve azok gyó;zatilag elfogadható savaddíciós sói elkészíthetők jyszer formájában a szokásos szilárd vagy foiyéy hordozókkal elkeverve, adott esetben egyéb hatótokkal elkeverve. A késrftmény alkalmas tehet is, rektális, pareaterál* vagy lokális használatra.
