178347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok előállítására
5 178347 6 Sztreptomicin : 10 jzg Tetraciklin : 10 [zg + Cefaloridin: 5 tzg — Kenamicin: 5 [zg + Ampicillin: 2 tzg 4-A fenti azonosító adatok alapján úgy tűnik, hogy ez a mikroorganizmus a Methylococcus egy törzse. Ugyanakkor különbözik valamennyi, korábban leírt Methylococcus törzstől, mivel 55 °C-on növekedést 10 mutat, és nem képez kolóniákat ásványi sókon agar lemezen, kivéve, ha a fentiekben ismertetett eljárást követjük. A találmány szerinti eljárás során alkalmazott folyékony táptalaj valamely nitrogén-tartalmú vegyü- 15 letet is tartalmaz, amely ammónia, karbamid, valamely ammóniumsó, így szulfát, klorid vagy valamely nitrát, például valamely alkálifémnitrát lehet. A vegyület általában 3—50 g/liter koncentrációban van jelen. Egyéb elemek is jelen lehetnek a táptalajban, így 20 például foszfor, kén, magnézium, vas. A foszfor-forrás előnyösen egy vagy több foszfát, például K2HP04, KH2P04, Na2HP04 vagy (NH4)2HP04, vagy foszforsav, előnyösen 3—20 g/liter koncentrációban. A kénforrás lehet kénsav vagy valamely szulfát, például 25 (NH4)2S04, alkalmasan 0,5—5,0 g/liter koncentrációban. A két fém valamely sója alakjában lehet jelen, például a táptalaj 0,2—2,0 g/liter MgS04.7 H20-t és 0,01—0,1 g/liter FeClj.6 H20-t tartalmazhat. A táptalaj egyéb elemek nyomnyi mennyiségeit is 30 tartalmazhatja, az elemek megfelelő sóinak alakjában, például kalciumot, mangánt, cinket, kobaltot, molibdént és bőrt. Alkalmas táptalajok például a következők: Az 1—NSM jelű táptalaj a következő alkotórészeket 35 tartalmazza : kh2po4 Na2HP04 NaNOj MgS04.7 H20 FeS04.7 H20 Ca(NOj)2. %H20 CuS04.5 H20 ZnS04.7 H20 MnS04.4H20 Na2Mo04.2 H20 1,6 g/liter 1,16 g/liter 1,18 g/liter 40 0,08 g/liter 0,014 g/liter 0,025 g/liter 4x 10-3 g/liter 3.4 x 10~4 g/liter 45 3 x 10-4 g/liter 2.4 x 10~4 g/liter A 2—ASM jelű táptalaj szintén a fenti összetevőket tartalmazza azzal az egyedüli eltéréssel, hogy 1,18 50 g/liter (NH4)2S04-ot tartalmaz NaNOj helyett. A 3—USM jelű táptalaj az 1—NSM-el azonos összetételű, azzal az egyedüli eltéréssel, hogy 2,0 g/liter karbamidot tartalmaz NaNOj helyett. Az 5—C jelű táptalaj a következő alkotórészeket 55 tartalmazza: kh2po4 Na2HP04 NaNOj MgS04.7 H20 FeS04.7 HjO Ca(NOj)2.4 H20 CuS04.5H20 ZnS04.7 H20 1.6 g/liter 1,16 g/liter 3,18 g/litei 0,107 g/liter 0,009 g/liter 0,06 g/liter 3 x 10~4 g/liter 3.6 x 10-4 g/liter 60 65 MnS04.H20 5 x 10-4 g/liter Na2Mo04.2 H20 3,1 x lO’4 g/liter CoC12.6 H20 1,5 \ 10 4 g/liter A találmány szerinti eljárást megvalósíthatjuk szakaszosan félfolyamatosan, előnyösen azonban folyamatos, áramló kultúrában. Tenyésztés céljából a mikroorganizmusokkal beoltjuk a táptalajt, amely metánt és oxigént tartalmazó gázkeverékkel van érintkezésben. A metánt természetes gáz alakjában alkalmazhatjuk. Folyamatos áramló kultúra esetében a mikroorganizmusokat megfelelően kialakított fermentációs készülékben tenyésztjük, például keverős, terelő tárcsás fermentorban, vagy permetező torony-fermentorban, amely vagy belső hűtéssel, vagy külső recirkuláló hűtőklgyóval van ellátva. Friss táptalajt szivattyúzunk folyamatosan a kultúrába óránként 0,02—1,00 kultúra-térfogat sebességgel, és a kultúrát olyan sebességgel távolítjuk cl, hogy a kultúra térfogata állandó maradjon. A metánt és oxigént, és adott esetben széndioxidot vagy egyéb gázokat tartalmazó gázkeveréket előnyösen olyan módon hozzuk érintkezésbe a táptalajjal, hogy a készülék alján levő osztótárcsán keresztül folyamatosan buborékoltatjuk. A kultúra oxigénforrása levegő, oxigén vagy oxigénben dúsított levegő lehet. Az elhasznált gázt a készülék felső részéből távolítjuk el. Az elhasznált gázt vagy külső csövön át, vagy belül, gázbevezető járókerék segítségével recirkuláltathatjuk. A gázáramokat és a recirkulációt úgy választjuk meg, hogy maximális mikroorganizmus-növekedést és maximális metánhasznosítást érjünk el. A kultúra hőmérsékletét általában 30 °C és 50 "C, előnyösen 38 °C és 50 °C között tartjuk. A kultúra pH-értékét valamely lúg, például NaOH, KOH, NH4OH és/vagy valamely sav, például H2S04 vagy HjP04 megfelelő adagolásával 6,0 és 8,0, előnyösen 6,0 és 7,0 között tartjuk. A mikroorganizmus sejteket bármely általánosan használt ismert módszerrel nyerhetjük ki a táptalajból, például flokkulálással, kiülepítéssel és/vagy lecsapással, és ezt követő centrifugálással és/vagy szűréssel. Ezután a biomasszát szárítjuk, például fagyasztva vagy porlasztva szárítással, és ebben az alakban használjuk fel, mint emberi vagy állati protein táplálékot vagy táplálékadalékot. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa A T4 jelű vegyes kultúrát és a Methylococcus 999 törzs egy tiszta kultúráját folyamatos kultúrában, aszeptikus körülmények között egy 2,5 literes munkaterű fermentorban, keverés mellett tenyésztjük, (Biotec Fermenter, LKB Co. Ltd.). 2: 1 térfogatarányú metánlevegő elegyet buborékoltatunk a folyékony komponenseken át 900—1200 ml/perc sebességgel. A közeg hőmérsékletét 42 °C-on, és a pH-értéket 0,5 n nátriumhidroxid-oldat és 0,5 n káliumhidroxid-oldat automatikus adagolásával 6,8 értéken tartjuk. A közeget 1200 fordulat/perc sebességgel keverjük. Friss közeget szállítunk folyamatosan a kultúrába egy perisztaltikus pumpa segítségével, és a kultúrát ugyanezzel a sebes-3
