178088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3,20-dioxo-4,9-dién-21-hidroxi-szteroidok előállítására
9 178088 10 A cirkuláris dikroizmus vizsgálat és a röntgendiffrakciós vizsgálat alapján meghatározhatjuk, hogy a B izomer a 21R konfigurációjú vegyületnek, az A izomer pedig a 21S konfigurációjú vegyületnek felel meg. 3. példa (6,7—3 H)-l 7béta-(2-hidroxi-l -oxo-propil)-17alfa-metil-ösztra4,9-dién-3-on (A és B izomer) A lépés (6,7-3H>17alfa-metil-17béta-(2-jód-l-oxo-propil)-ösztra-5(10),9(ll)-dién-3-on-3- -etilénketál (az izomerek keveréke) Megismételjük a 2. példa A lépését azzal az eltéréssel, hogy kiindulási vegyületként 17,5 mg (6,7-3 H)-l 7alfa-metil-l 7béta-(l-oxo-propil)-ösztra-5( 10),9( 11 )-dién-3-on-3-e tilénketált használunk. A dm szerinti terméket kapjuk gyantaszerű alakban. Ezt közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben. B lépés (6,7-3 H)-l 7alfa-metil-l 7béta-(2-acetoxi-l - -oxo-propil)-ösztra-5(10),9(l l)-dién-3-on-etilénketál (az izomerek keveréke) Az előbbi bekezdésben kapott terméket a 2. példa B lépésében leírt módon alakítjuk át. A reakcióelegyet 0,1% trietilamint tartalmazó etilacetáttal extraháljuk. A további műveleteket a 2. példa B lépésében ismertetett módon végezzük. A dm szerinti vegyületet kapjuk, amelyet a C lépésben használunk fel. C lépés (6,7-3H)-17béta-(2-acetoxi-l-oxo-propil)-17alfa-metil-ösztra-4,9-dién-3-on (az izomerek keveréke) Megismételjük a 2. példa C lépését azzal az eltéréssel, hogy kiindulási vegyületként az előbbi bekezdésben említett anyagot használjuk. A kapott gyantaszerű terméket a következő lépésben használjuk fel. D lépés (6,7-3 H)-l 7béta<2-hidroxi-l -oxo-propil)-17alfa-metii-ösztra4,9-díén-3-on (A és B izomer) Az előbbi bekezdés szerinti tríciumozott vegyületből kiindulva megismételjük a 2. példa D lépését. 2,64 mg B izomert (21R vegyület) majd 1,69 mg A izomert (21S vegyület) különítünk el. A 3. példában kiindulási vegyületként használt (6,7-3H)-17alfa-metii-17béta-(l-oxo-propil)- ösztra-5(10),9(1 l)-dién-3-on-3-etilénketált az alábbiak szerint álltjuk elő: A 2 374 335 számú közzétett francia szabadalmi bejelentésben leírt (6,7-sH)-17alfa-meti]-17béta-(l-oxo-propil)-ösztra4^-dién-3-on 23,8mg-ját közömbös atmoszférában összekeverjük 2 ml etilénglikollal, 5 mely 1 mg p-toluolszulfonsavat tartalmaz, valamint 1 ml klórhangyasavetilészterrel. A kapott szuszpenziót lOperdg melegítjük 60 °C hőmérsékleten, azután trietilamint adunk hozzá, lehűtjük, és hozzáadunk egy telített vizes nátriumhidrogénkarbonát- 10-oldatot. A kapott keveréket etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot sóoldattal mossuk, azután megszárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott terméket szilikagélen kromatografáljuk nyomás alatt. Eluálószerként benzol és 15 etilacetát 9 :1 arányú elegyét használjuk, amely 0,5% trietilamint tartalmaz. Az alábbiakban ismertetjük a találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek gyógyászati hatásával kapcsolatos vizsgálataink eredményeit: 201. Az A vegyület progesztomimetikus aktivitása a) Az A vegyület progesztomimetikus aktivitását a hormonreceptoros módszerrel vizsgáltuk. E módszer leírása az alábbi irodalmi helyen található: J. P. Raynaud és mts. „J. Ster. Biochem” 1975, & 25 615—622 és „Physiology and Genetics of Reproduction 1975 part A 143—160”. Nemileg éretlen nőstény nyulaknak perkután úton beadunk 25 pg ösztradiolt. 5 nap múlva az állatokat levágjuk, a méhet kiemeljük és homogeni- 30 záljuk egy pufferban, amelynek pH-ja 7,4, és amely 10 mmól trometamint, 0,25 mól szacharózt és sósavat tartalmaz. A homogenizátumot 1 órán át centrifugáljuk 105 000 g értéken. A felső folyadékfázist vagy citoszolt azután 1 :50 arányban felhí- 35 gítjuk (súly/térfogat arányban). Azonos térfogatú citoszolt tartalmazó csöveket 2 órán át inkubáiunk 0°C hőmérsékleten növekvő koncentrációjú nem-radioaktív 17,21-dimetil-19-nor- 4,9-pregnadién-3,20-dion (a továbbiakban R vegyü- 40 let) jelenlétében vagy ilyen vegyület nélkül, továbbá progeszteronnal vagy a vizsgálandó vegyülettel, valamint rögzített koncentrációjú tríciumozott 17,21 -din» til- 19-nor4,9-pregnadién-3,20-dionnal (a továbbiakban tríciumozott R vegyület). 45 Két óra múlva és 24 óra múlva meghatározzuk a tríciumozott R vegyület radioaktivitását aktívszén/dextrán (1,25%: 0,625%) adszorbciós módszerrel. A mérési eredményeket diagrammra visszük, és meghatározzuk azt az egyenes vonalat, amely az 50 abszcissza tengellyel párhuzamos, és amelynek ordinátája Bo 55 I50 ---------------------Bo a kötött tríciumozott R termék maximális mennyisége abban az inkubátumban, amely kizáró- 60 lag tríciumozott R terméket tartalmaz. Bmin a nem specifikus kötött tríciumozott R termék minimális mennyisége egy olyan inkubátumban, amely tríciumozott R terméket és nagy fölöslegben levő (2500 10_9M) R terméket tartal- 6S máz. 5
