178088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3,20-dioxo-4,9-dién-21-hidroxi-szteroidok előállítására
11 178088 12 Meghatározzuk „a tríciumozott kötött R tennék g %-os arányát ( —) a nem tríciumozott tennék Bo koncentrációja logaritmusának függvényében. Az így felvett görbe és az előbbi I50 egyenes metszéspontjaiból meghatározhatjuk a CP és CX értékeket. CP: a nem tríciumozott progeszteronnak az a koncentrációja, amely 50%-ban gátolja a tríciumozott R termék rögzítését. CX: a vizsgált vegyületnek az a koncentrációja, amely 50%-ban gátolja a tríciumozott R tennék rögzítését. A vizsgált vegyület relatív affinitása (RLA) az alábbi képlettel számítható: CP RLA= 100 x — CX Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Vegyület , RLA 2 óra RLA 24 óra Progeszteron 100 100 A vegyület 204 688 Amint a táblázat adataiból kitűnik, az A vegyületnek sokkal nagyobb a méhben található specifikus progeszteron-receptor iránti aktivitása, mint a progeszteroné. Az A vegyület tehát igen erős progesztomimetikus aktivitással rendelkezik. b) A progesztomimetikus aktivitást meghatároztuk Clauberg teszttel is. Oly módon jártunk el, hogy három nemileg éretlen nőstény nyulat előzetesen szenzitizáltunk napi öt mikrogramm ösztradiol szubkután úton történd beadásával öt napon át. Két nappal később a vizsgálandó vegyületet juttattuk be szervezetükbe szubkután úton oly módon, hogy a vizsgálandó vegyületet naponként adtuk be öt napon keresztül. A hatodik napon az állatokat levágtuk és a méhben annak felnyitása után megfigyeltük a méhnyálkahártya szivacsos rétegének fejlődését, ennek foka ugyanis a progesztomimetikus hatás fokmérője. Az eredményeket Mac Phail egységekben rögzítettük. A kísérlethez az A vegyületet 5% benzilalkoholt tartalmazó szezámolajai készített oldatban használtuk. Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: A kezeléshez Napi dózis Mac Phail használt anyag (Mg) egységek * 3 A vegyület 1 2,2 3 3,4 10 3,4 Egy mikrogrammos napi dózis beadása esetén 2,2 Mac Phail egységgel jellemezhető aktivitást tapasztaltunk. A vizsgált vegyület tehát igen erős progesztomimetikus aktivitást mutat. II. Az A vegyület antiösztrogén hatásának vizsgálata: Az A vegyület antiösztrogén hatását nemileg fejletlen nőstény egéren vizsgáltuk egy olyan módszerrel, amelyet a Rubin-módszer (Endo. 1951. 49, 429) mintájára alakítottunk ki, és amely hasonló A Dorfman és munkatársai által ismertetett módszerhez. (Methods in Hormone Research. Dorfman, 1962, vol. II. 118.) ösztrogén anyagként ösztradiolt használtunk Olyan kísérleti csoportoknak amelyek négy darab 18 napos nőstény egérből álltak, szubkután úton három napig adtunk be vagy ösztradiolt önmagában, vagy egy vizsgálandó vegyületet önmagában, vagy ösztradiolt és egy vizsgálandó vegyületet. Az utóbbi esetben a két szteroidot két különböző helyen injektáltuk a szervezetbe. A negyedik napon az egereket levágtuk, méhüket kiemeltük és megmértük. Az ösztradiolt 5% benzilalkoholt tartalmazó szezámolajjal készített oldat alakjában alkalmaztuk. Az összdózis 0,27 Mg volt. Minden egérnek 0,1 ml térfogatú injekciót adunk be. A vizsgálandó vegyületet szintén 5% benzilalkoholt tartalmazó szezámolajjal készített oldat alakjában alkalmaztuk. A kísérleti állatoknak 0,3 Mg, 1 Mg, 3 Mg és 10 Mg összdózisokat adtunk be 0,1 nú térfogatú injekciókban. Vizsgálataink eredményeit az alábbi táblázatban foglaljuk össze. A teljes A méh átlagos A vizsgált vegyület dózis (jag) súlya (mg) Kontroll 0 14,4 ösztradiol 0,27 99,3 A vegyület 0,3 14,6 A vegyület + ösztradiol 0,3 + 0,27 80,5 (-19%) A vermiet 1 13,0 A vegyület + ösztradiol 1 + 0,27 59,6 (-39%) A vegyület 3 17,1 A vegyület + ösztradiol 3 + 0,27 38,5 (-61%) A vegyület 10 15,8 A vegyület + ösztradiol 10 + 0,27 39,6 (-60%) Amint az eredmények mutatják, a vizsgált vegyület 1 Mg-os dózisban jól megfigyelhető antiösztrogén hatást mutat az ösztradiollal szemben. A gyógyászati készítmények előállítására az alábbi példát adjuk meg: Tablettát készítünk az alábbi összetétellel: A vegyület (1. példa 100 Mg tabletta készítési vivőanyag q.s.ad.l00mg Vivőanyagként talkumot, keményítőt és magnézium-sztearátot használunk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az I általános képletű vegyületek 2 ÍR és 21S epimerek vagy epimer-keverék alakjában való előállítására, ahol X jelentése hidrogénatom vagy trídumatom, Rí jelentése 1-3 szénatomos alkil-csoport, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
