178004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin származékok előállítására
5 178004 6 0,4 ml (2,86 mmól) trietilamint, és 4 órán át melegítjük 60—70 °C-on. Ezt követően a reakcióelegyet 30 ml etilacetáttal hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, etilacetáttal mossuk, majd vákuumban szárítjuk. 0,58 g (80%) cím szerinti ami- 5 dino-pentapeptid-amid-sót kapunk. R* 0,63-0,68, [ö]*° = + 4® (c = 1, In ecetsavban). C33H4809N8S- 732,844 2. példa Amidino-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenilalanin-amid-acetát-hidrát előállítása (I képletben A jelentése D-metionin-gyök és 15 B jelentése amino-csoport) 1. lépés: terc-butiloxikarbonil-D-metionil-glicil-L-fenilalanin-amid 20 5,35 g (15 mmól) benziloxikarbonil-glicil-L-fenildanin-amidot [Fruton és Bermann: J. Biol. Chem., 145, 253 (1942)] 100 ml metanolban feloldunk, és 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katdizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katali- 25 zátort kiszűrjük, metanolld mossuk, majd az egyesített metanolos oldatokat csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékként kapott glicil-L-fenil-danin-amidot (Rf 0,19—0,29) és 6,43 g (15 mmól) terc-butiloxikarbonil-D-metionin-2,4,5-tri- 30 klórfenilésztert (Broadbent és munkatársd: J. Chem. Soc., 1967, 2632) 30 ml piridinben oldjuk és éjszakán át állni hagyjuk. A reakció elegye t csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot 1% merkapto-etanolt tartdmazó dietÜéterrel eldörzsöl- 35 jük, szűrjük, dietiléterrel mossuk és szárítjuk. 5,1 g (75%) cím szerinti védett tripeptid-amidot kapunk. Rf 0,70-0,77. C2iH3205N4S-452,564 40 2. lépés: D-metionil-glicil-L-fenilalanin-amid-klórhidrát 4,52 g (10 mmól) védett tripeptid-amidot (1. lépés) 20 ml etilacetátban szuszpendálunk, majd 45 keverés és jeges hűtés közben hozzáadunk 40 ml 11-15% sósavat tartdmazó etüacetátot. Egy óra keverés után a reakcióelegyet 60 ml etilacetáttd hígítjuk, a csapadékot szűrjük, etilacetáttd mossuk és szilárd kálium-hidroxid mellett vákuumban 50 szárítjuk. 3,7 g (95%) cím szerinti tripeptid-amid-ldórhidrátot kapunk. Rf 0,50-0,55. C16H2s03N4Sa-388,915 55 3. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenildanin-amid 1,4 g (5 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozint [Anderson és McGregor: J. Am. Chem. Soc., 79, 60 6180 (1957)] lOnd dimetilformamidban feloldunk, és az oldatot -15*C-ra hütjük. Ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 0,6 ml (5 mmól) N-metil-morfdint és 0,7 ml (5 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 10 perc keverés 65 után olyan szuszpenziót, amelyet úgy készítettünk, hogy 1,95 g (5 mmól) tripeptid-amid-klórhidrátot (2. lépés) szuszpendáltunk 10 ml dimetilformamidban, hozzáadtunk 0,7 ml (5 mmól) trietilamint, és —15 *C-ra hűtöttük. A reakcióelegyet 2 órán át —15 ®C-on és 1 órán át 0 *C-on keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk, majd 30 ml forró etüacetátból kristályosítjuk. 2,15 g (70%) cím szerinti védett tetrapeptid-amidot kapunk. Rf 0,64-0,68. C30H41O7NjS- 615,734 4. lépés: L-tirozil-D-metionil-glidl-L-fenildanin-amidacetát-hidrát 1,85 g (3 mmól) védett tetrapeptid-amidot (2. példa, 3. lépés) 5 ml etilacetátban szuszpendálunk, majd keverés és jeges hűtés közben hozzáadunk 15 ml 11—15% sósavat tartalmazó etilacetátot. Egy óra keverés után 20 ml etilacetáttal hígítjuk a reakcióelegyet, a kivált csapadékot kiszűrjük, etilacetáttal mossuk és szárítjuk. Az így nyert terméket 10 ml vízben oldjuk, és 15 ml acetát-ciklusú anioncserélő gyantára (AG 1—X2, Bio-Rad, Richmond, California) öntjük. A gyantát 80 ml vízzel mossuk, majd a vizes oldatokat lioftlizáljuk. 1,07 g (60%) cím szerinti tetrapeptid-amid-acetát-hidrátot kapunk. Rf 0,55-0,60, Rf 0,89-0,97, [a]f)0 = + 82° (c = 1, In ecetsavban). C27H3908N5S-593,688 5. lépés: amidino-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenüalanin-amid-acetát-hidrát 0,6 g (lmmól) tetrapeptid-amid-acetát-hidrátot (2. példa, 4. lépés) és 0,24 g (1,2 mmól) pirazol-származékot (1. példa, 1. lépés) 2 ml etanolban oldunk, hozzáadunk 0,2 ml (1,2 mmól) trietilamint, és a reakcióelegyet 5 órán át 60 “C-on melegítjük. Ezt követően az oldatot csökkentett nyomáson betöményítjük, majd etilacetáttal (kb. 20 ml) hígítjuk. A kivált terméket kiszűrjük, etilacetáttal mossuk, szárítjuk, majd 10 ml vízben feloldjuk, és az oldatot liofílizáljuk. 0,51 g (80%) cím szerinti amidino-tetrapeptid-amid-sót kapunk. Rf 0,54—0,59, Rf 0,65-0,70, [oíjf,0 = + 40,5° (c=l, 1 n ecetsavban). C28H41OsN7S-635,730 3. példa Amidino-L-tirozil-D-norieucil-glicil-L-fenilalanin-amid-acetát-hidrát előállítása (I képletben A jelentése D-norleucil-gyök és B jelentése amino-csoport) 1. lépés: benziloxikarbonil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanin-amid 3,98 g (15 mmól) benziloxikarbonil-D-norleucint [Izumiya és munkatársai: J. Chem. Soc. Japan, 79, 420 (1958)] 15 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldatot -15 ®C-ra hűtjük. Ezen a hőmérsékleten 3
