178004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin származékok előállítására
7 178004 8 keverés közben hozzáadunk 1,7 ml (15mmól) N-metil-morfolint és 2,0 ml (15 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 10 perc keverés után az alábbi módon készített dimetilformamidos oldatot. 5,35 g (15 mmól) benziloxikarbonil-glicil-L-fenilalanin-amidot [Fruton és Bergmann: J. Biol. Chem., 145, 253 (1942)] 100 ml metanolban hidrogénezzük 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében, majd a reakció végén a katalizátort kiszűrjük, a metanolt csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 15 ml dimetüformamidban feloldjuk. A reakcióelegyet -15 °C-ra hűtjük, majd 2 órán át —15 *C-on és 1 órán át 0 *C-on keveqük. Ezt követően csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Az így nyert terméket etflacetát és petroléter elegyéből kristályosítjuk. 5,0 g (70%) cím szerinti védett tripeptid-amidot kapunk. Rf 0,75—0,80. C2JH3205N4 -468,538 2. lépés: D-noiieucil-gUcil-L-fenilalanin-amid-klórhidrát 4.7 g (10 mmól) védett tripeptid-amidot 3. példa (1. lépés) szuszpendálunk 50 ml etanol és 50 ml dimetilformamid elegyében, hozzáadunk 10 ml 1 n sósavat, és 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, dimetflformamiddal mossuk, majd az oldatokat bepároljuk. A párlási maradékot etilacetáttal eldörzsöljük, szűrjük, és etilacetáttal mossuk. 3,05 g (82%) cím szerinti tripeptid-amid-klórhidrátot kapunk. R? 0,45-0,55. C17H2703N4C1- 370,875 3. lépés: terc-butiloxikarbonü-L-tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanin-amid 1,4 g (5 mmól) terc-butiloxikaibonil-L-tirozint és 1,85 g (5 mmól) tripeptidamid-klórhidrátot 3. példa (2. lépés) a 2. példa 3. lépésben leírt módon kondenzálunk. 1,94 g (65%) cím szerinti védett tetrapeptid-amidot kapunk. Rf 0,70—0,75. C31H4307N5 -597,694 4. lépés: L-tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanin-amidacetát-hidrát 1.8 g (3 mmól) védett tetrapeptid-amidot (3. példa, 3. lépés) a 2. példa 4. lépésben leírt módon alakítunk tovább. 1,12 g (65%) cím szerinti tetrapeptid-amid-acetát-hidrátot kapunk. R? 0,60-0,65, Rf 0,9-0,95, [o]q° = 80,5° (c = l, 1 n ecetsavban). C28H4i08Ns -575,648 5. lépés: amidino-I^tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanin-amid-acetát-hidrát 0,58 g (1 mmól) tetrapeptid-amid-acetát-hidrátot 3. példa, 4. lépés) a 2. példa 5. lépésben leírt nődön alakítunk tovább. 1,39 g (75%) dm zerinti amidino-tetrapeptid-amid-sót kapunk. Rf 1,62—0,70, [a]o° = + 40,5* (c = 1, In ecetsavban). :29H4308N7 -617,690 4. példa Amidino-L-tirozil-D-norleucil-glicil-Lfenil al anil-L-prolin-amid-acetát-hidrát előállítása (I képletben A jelentése D-norleucil-gyök és B jelentése L-prolin-amid-csoport) 1. lépés: benziloxikarbonil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil-L-prolin 7,95 g (30 mmól) benziloxikarbonil-D-norleucint [Izumiya és munkatársai: J. Chem. Soc. Japan, 79, 420 (1958)] és 5,95 g (30 mmól) 2,4,5-triklór-fendt feloldunk 60 ml etilacetátban és jeges vízzel lehűtjük. A hűtött oldathoz 5,8 g (28 mmól) didklohexil-karbodiimidet adunk. Két óra után a kivált dicikldhexil-karbamidot kiszűrjük, az , oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot n-hexánnal kristályosítjuk, szűrjük, n-hexánnal mossuk és levegőn szárítjuk. Az így kapott aktív észtert (9,35 g, 75%, Rf 0,82-0,92) feloldjuk 40 ml piridinben, hozzáadunk 6,4 g (20 mmól) glicü-L-fenilalanil-L-prolint (858 453 számú belga szabadalmi leírás) és 2,8 nil (20 mmól) trietflamint, és szobahőmérsékleten keverjük éjszakán át. A reakdóelegyet bepároljuk, a maradékot 50 ml dietiléterben és 50 nü 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban feloldjuk. A vizes fázist kétszer 30 ml dietiléterrel mossuk, majd 1 n kénsavval pH = 3-ra savanyítjuk. Az elkülönülő terméket háromszor 50 ml etrlacetátba átrázzuk, az egyesített etilacetátos oldatokat kétszer 20 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot ciklohexánná eldörzsöljük, szűrjük, cildohexánnal mossuk és szárítjuk. 9,97 g (88%) cím szerinti védett tetrapeptidet kapunk. Rf 0,28—0,38. C30H3807N4 -566,636 2. lépés: benziloxikarbonil-D-norleucil-glicil-I^fenilalanil-L-prolin-amid 8,5 g (15 mmól) védett tetrapeptidet (4. példa, 1. lépés) 30 ml tetrahidrofuránban feloldunk, és az oldatot —15 *C-ra hűtjük. Ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 1,7 g (15 mmól) N-metrl-morfolint és 2,0 ml (15 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 10 perc keverés után 8 ml 5 °C alá hűtött 20-25%-os vizes ammónia-oldatot. A keverést 1 órán át folytatjuk 0 °C alatti hőmérsékleten, majd a reakcióelegyből a tetrahidrofúránt csökkentett nyomáson kidesztilláljuk. A maradékhoz 20 ml vizet és 50 ml etilacetátot adunk, és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist 20 ml etilacetáttal, az egyesített etilacetátos oldatokat háromszor 20 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot dietiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, dietiléterrel mossuk és szárítjuk. 9,3 g (91%) cím szerinti védett tetrapeptid-amidot kapunk. Rf 0,4—0,5. C30H39O6Ns -565,652 5 10 15 20 2'5 30 35 40 45 50 55 60 65
