178001. lajstromszámú szabadalom • Eljárás morfinszerű hatással rendelkező új pentapeptidek és származékaik előállítására
3 178001 4 ellátott alfaaminosavakal és/vagy peptid-fragmenssel kondenzálunk, adott esetben az amino-terminálison védett peptid-köztiterméket észter- vagy amid-származékká alakítjuk, és a védőcsoport-eltávolítás után kívánt esetben sót képezünk. Az I általános képletű vegyületek in vivo morfin-szerű hatását Met-enkefalinhoz, illetve morfinhoz viszonyítva az I. táblázat tartalmazza. A vizsgálatokat D’Amour és Smith [J. Pharm. Ther. 72, 74 (1941)], illetve Chermat és Simon [J. Pharmacol. (Paris) 6, 489 (1975)] módszerével végeztük és a táblázatban a morfin aktivitását 100-nak vettük. A vizsgálati eredményekből látszik, hogy a II képletű Met-enkefalinnal szemben az I általános képletű vegyületek morfin-szerű hatása in vivo is megnyilvánul és közülük többnek az aktivitása meghaladja a kontrollként használt morfinét is. I. táblázat A Tyr-A-Gly-Phe-Pro-X—Y általános képletű vegyületek morfin-szerű hatása A példa sor- Tyr-A-Gly-Pheszáma-Pro-X-Y Aktivitás in vivo 5.-D-Ala-O-H 24 8.-D-Nle-O-H 100 7.-D-Met-O-H 133 11.-D-Ala-NH-H 390 6.-D-Ala-NH-Et 1690 9.-D-Met-NH-Et 1690 10.-D-Met-NH-H 5000 kontroll: Tyr-Gly-Gly-Phe-Met—OH (II) 0 kontroll: morfin 100 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: Az aminosavak, peptidek, származékaik és szubsztituenseik rövidítése megfelel a szakirodalomban használt rövidítéseknek: Biochemistry 5, 2485 (1966), 6, 322 (1967), J. Biol. Chem. 241, 2491 (1966), 242, 555 (1967), 247, 977 (1972). Ezen kívül: Nie = L-norleudn = L-2-amino-hexánsav Z = benziloxikarbonil-csoport Boc = terc-butiloxikarbonü-csoport Me = metil-csoport Et = étű-csoport ONP - p-nitro-fenoxi-csoport OTCP = 2,4,5-triklór-fenoxi-csoport OPCP = pentaklór-fenoxi-csoport A példákban a hőmérsékleteket °C-ban adjuk meg. Az Rf-értékeket szilikagél (Kieselgel G, REANAL, Budapest) rétegkromatográfiával határoztuk meg az alábbi oldószerekben: 1. Kloroform-metanol (9 : 1) 2. Etüacetát-piridin-ecetsav-víz (240 : 60 : 2 :11) 3. Etflacetát-piridin-ecetsav-víz (120 : 20 :6 :11) 4. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 :20 : 6 :11) 5. Etüacetát-piridin-ecetsav-víz (30 :20 :6 :11) Az oldatokat csökkentett nyomáson pároltuk be 40°-os vízfürdőről. A peptidek aminosav-analízisét JLC-5AH analizátorban végeztük teljes hidrolízis (6 n HC1, 24 óra, 110°) után. Az 1-4 és 12. példák nem a találmány tárgyához tartoznak. 1. példa L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenüalanil-L-norleucin előállítása 1. lépés: benziloxikarbonil-L-fenilalanil-L-norleucin-metÜészter 4,8 g (10 mól) Z-Phe—OTCP-t [J. Pless és R. A. Boissonnas: Helv. Chim. Acta 46, 1609 (1963)] és 2 g (U mól) H—Nle-OMe.HCl-t [H. M. Flowers és W. S. Reith: Biochem. J. 53, 657 (1953)] feloldunk 10 ml piridinben, és 1,2 ml (11 mól) N-metil-morfolin hozzáadása után 3 órán át állni hagyjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml 1:1 arányú etilacetát-víz elegyben, a szerves fázist mossuk 1 n sósavval és vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éténél mossuk és szárítjuk. 3,6 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 123-124 °C, R) 0,89-0,93. 2. lépés: benziloxikarbonil-glicil-L-fenilalanil-L-norleucin-metilészter 5,55 g (13 mmól) Z-Phe—Nle-ÖMe-t (1. példa, 1. lépés) feloldunk 100 ml metanolban, és palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén (Rf 0,23—0,25) a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, és a maradékot 25 ml piridinben feloldjuk. Hozzáadunk 4,66 g (12 mmól) Z-Gly-OTCP-t [J. Pless és R. A. Boissonnas: Helv. Chim. Acta 46, 1609 (1963)] és 3 órán át állni hagyjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 5,28 g (91%) cim szerinti terméket kapunk. Op.: 110-112°, R] 0,30-0,90. 3. lépés: benziloxikarbonil-L-tirozil-D-al anil-glicil-L-fenil al anil-L-norleucin-metilészter 1.93 g (4 mmól) Z-Gly-Phe-Nle-OMe-t (1. példa, 2. lépés) feloldunk 30 ml metanolban, és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
