177804. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározására
MAGYAR SZABADALMI 177804 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS Bejelentés napja: 1978. IV. 27. (CA—422) Elsőbbsége: 1977. IV. 27. (P 27 18 700.4) Német Szövetségi Köztársaság Nemzet közi osztályozás : G 01 N 33/16 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI Közzététel napja: 1981. VI. 27. HIVATAL Megjelent: 1983. X. 31. Feltaláló: Dr. Thoma Hans A., oki. vegyész, München Német Szövetségi Köztársaság Szabadalmas : Chandon Investment Planning Ltd., Gran Cayman, Cayman Island, Eljárás hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározására 1 A találmány tárgya eljárás hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározására. Több eljárás ismert emberi szérumban levő részbenspecifikus vagy aspecifikus kötőfehérjéhez kötött hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatáro- 5 zására. A viszonylag új radioimmunológiai módszerek jelentősen hozzájárultak a pontos hormonmeghatározáshoz. A radioimmunológiai meghatározások részletes leírása megtalálható például a Clinical Chemistry 19, 145 10 (1973) cikkben. A Clinical Chemistry 19, 1339 (1973) és Clinical Chemistry 21, 829 (1975) cikkek olyan radioimmunológiai módszereket írnak le, amelyeknél gélbe zárt antitestet alkalmaznak. Az antitestek gélbe zárása azért előnyös, mert így kizárható az antitestek kölcsön- 15 hatása nagy molekulasúlyú molekulákkal. Ez az ismert eljárás azonban nem irányul a hormonok teljes mennyiségének meghatározására, ami pedig orvosi szempontból lényeges. A hormonok teljes mennyiségének meghatározására 20 alkalmas eljárás a kötőfehérjék hidrolízisét követő radioimmunológiai módszerek segítségével a J. Clin. Endocrinol. Metab. 42,189 (1976) és Clinical Chemistry 22, 1850 (1976) cikkekből ismeretes. Ezekben a cikkekben kimutatják, hogy az enzimatikus hasítás lényegesen 25 előnyösebb az addig alkalmazott oldószeres extrakciónál és hődenaturációnál. Különös előnyként említik, hogy nincs szükség a szerves oldószerekkel végzett extrakcióra és a próba kromatográfiás tisztítására, a meghatározási idő és a meghatározás költségei lecsökken- 30 2 nek, az oldatban végzett szcintillációs számlálás elmarad, a fajlagosság és pontosság megnő, a meghatározás automatizálható és a módszer univerzális. A kötőfehérje hidrolíziséhez használt enzim azonban az eljárás következő lépésében alkalmazott antitestet is képes bontani. Ezért az enzimet az antitest hozzáadása előtt inaktiválni kell. Az enzim inaktiválása több módon történhet, például a pH lényeges megváltoztatásával vagy hődenaturációval. Ez a denaturálási lépés azonban igen hátrányos. Újabb vegyszerek, azaz zavaró komponensek kerülnek a reakcióelegybe, vagy hődenaturáció esetén hosszadalmas a folyamat. A hőkezelés körülbelül 5 percig, a lehűlés körülbelül 15 percig tart. Ez a denaturálási lépés tehát lényeges akadály a meghatározás automatizálásánál. Továbbá minden rendszernél az alkalmazott enzim szerint másfajta denaturáció szükséges, ami az ismert meghatározási módszer általános alkalmazhatóságát és automatizálhatóságát gátolja. A találmány célja hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározására olyan eljárás kidolgozása, amelynél a denaturációs lépés elhagyható és ezáltal a meghatározási módszer általánosan alkalmazhatóvá válik, a meghatározási idő és a szükséges költség csökken, valamint a meghatározás automatizálása lehetővé válik. Ezt a célt a találmány szerinti eljárással úgy valósítjuk meg, hogy a részben specifikus vagy aspecifikus kötőfehérjékhez kötött hormonok vagy gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározása céljából a kötőfehérjéket 177804
