177750. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomást csökkentő hatású tioacil-L-aminosav-származékok előállítására
9 177750 10 N*-(3-Merkapto-2-benzil-propionil)-L-arginin A 12. példa szerinti eljárásban az Na-(3-acetiltio-2- -metil-propionil)-L-arginintN“-(3-acetiltio-2-benzil-propionil)-L-argininnel helyettesítve N“-(3-merkapto-2-benzil-propionil)-L-arginint kapunk, amelynek olvadáspontja 135 °C. 15. példa 16. példa 1000 db, egyenként 100 mg N-(3-merkapto-propionil)-L-fenilalanint tartalmazó tablettát a következő alkotórészekből készítünk : N-(3-merkapto-propionil)-L-fenilalanin 100 g. kukoricakeményítő 50 g. zselatin 7,5 g, Avicel (mikrokristályos cellulóz) 25 g, magnézium-sztearát 2,5 g-Az N-(3-merkapto-propionil)-L-fenilalanint és a kukoricakeményítőt összekeverjük a zselatin vizes oldatával. A keveréket megszárítjuk, és finom porrá őröljük. Az Avicelt majd a magnézium-sztearátot összekeverjük a granulátummal, amelyet azután tablettaprésen 1000 darab, egyenként 100 mg hatóanyagot tartalmazó tablettává préselünk. 17. példa 1000 darab, egyenként 200 mg N-(merkapto-propionil)-L-arginint tartalmazó tablettát a következő összetevőkből készítünk: N-(3-merkapto-propionil)-L-arginin 200 g, iaktóz 100 g, Avicel 150 g, kukoricakeményítő 50 g, magnézium-sztearát 5 g. Az N-(3-merkapto-propionil)-L-arginint, laktózt és Avicelt összekeverjük, majd elegyítjük a kukoricakeményítővel. Magnézium-sztearátot adunk hozzá. A száraz keveréket egy tablettaprésen 1000 darab 505 mg-os, egyenként 200 mg hatóanyagot tartalmazó tablettává préseljük. A tablettákat Methocel E 15 (metil-cellulóz) oldattal vonjuk be, amely színezőanyagként No. 6 sárgát tartalmaz. 18. példa Injekciós oldatot a következőképp készítünk: N-(3-meikapto-propionil)-L-fenilalanin 500 g, p-Hidroxi-benzoesav-metilészter 5 g, p-Hidroxi-benzoesav-propilészter 1 g, nátrium-klorid 25 g, injekciós minőségű víz feltölteni 5 literre. A hatóanyagot, a konzerválószereket és a nátrium-klorídot feloldjuk 3 liter injekciós vízben, majd feltöltjük 5 literre. Az oldatot steril szűrőn szűrjük, és aszepíiusan előre sterilezett fiolákba töltjük, amelyeket utána előre sterilezett gumi zárókupakokkal zárunk le. Jóllehet az angiotenzin I-nek az angiotenzin konvertáló enzim által angiotenzin Il-vé történő átalakulása valószínűleg a legfontosabb reakció a hipertenzió kortanában, az izolált enzim aktivitása kényelmesebben és pontosabban mérhető egy egyszerűbb peptid-szubsztrátum, a hippuril-L-hisztidil-L-leucin hasitási sebességének mérésével. Az I50 értékek (a vegyületnek az angiotenzin konvertáló enzim 50%-os inhibiálását okozó koncentrációi mikrogramm/ml-ben) meghatározása céljából az egyes vegyületek különböző koncentrációit adtuk 13 X x 100 mm-es kémcsövekbe a következő összetevőkkel együtt a jelzett végkoncentrációknál 0,25 ml végtérfogatban: 100 mmól 8,3 pH-jú kálium-foszfát puffer; 300 mmól nátrium-klorid; 5 mmól hippuril-L-hisztidil-L-leucin és 5 milliegység nyúltüdőböl preparált angiotenzin konvertáló enzim. Hasonlóképpen készítettünk inhibitort nem tartalmazó (100% aktivitás) és az enzim hozzáadása előtt megsavanyított (0% aktivitás) kontrollokat. Minden enzimatikus reakciót az enzimkomponens hozzáadásával indítunk be; a kémcsöveket 37 "C-on 30 percig inkubáljuk, és a reakciókat 0,25 ml 1 n sósavoldat hozzáadásával állítjuk le. Az angiotenzin konvertáló enzim hatására a hippuril-L-hisztidil-L-leucinból keletkező hípursavat etil-acetátba extraháljuk, szárazra pároljuk, vízben újra feloldjuk, és a 228 nm-en mért abszorpcióból határozzuk meg a mennyiséget. A vegyület különböző koncentrációi által okozott százalékos inhibíciót a 0% és 100% aktivitású kontrollokkal összehasonlítva számítjuk. A találmány szerinti egyes vegyületek azon koncentrációi, amelyek az angiotenzin konvertáló enzim aktivitását 50%-kal gátolják, a következő táblázatban láthatók: 19. példa A vegyület példaszáma I50 ([tg/ml) __ , 2 4. 1,8 6. ' 0,86 8. 0,17 10. 1,8 20. példa Az angiotenzin I konvertáló enzim inhibíciójának kiértékelésére szolgáló eljárást tengerimalac kimetszett ileumán a következőképp kell kivitelezni: 95% oxigén és 5% szén-dioxid elegyével levegőztetett 37*-os Krebs oldatban levő kimetszett tengerimalac ileumhoz a vegyületek különböző koncentrációit adjuk. Két perc múlva 25 ng/ml angiotenzin I-et adunk hozzá, és az ízotóniás kontrakciót mérjük. A jelen találmány szerinti egyes vegyületek azon koncentrációi (mikrogramm/mlben), amelyek az angiotenzin I kontraktilis aktivitását 50%-kal gátolják (IC50), a következő táblázatban láthatók: A vegyület példaszáma IC^ jjig/rnl) 2. 0,94 4. 2,0 6. 0,5 2 8. 0,9 10. 0,94 15. 4,1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
