177522. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbosztiril- és oxindol-származékok előállítására
7 177522 8 S 6-[4-(2,5-diklór-fenilszulfinil)-butoxi]-3,4-dihidrokarbosztiril, T 6-[4-(2-piridil-szulfonil)-butoxi]-karbosztiril és U 6-[4-(3,4-diklôr-fenilszulfinil)-butoxi]-3,4-dihidrokarbosztiril. 1. Trombocita aggregáció meghatározása Bom és Cross módszere szerint [J. Physiol. 170. 397 (1964)] A trombocita aggregációt egészséges kísérleti személyek lemezkegazdag plazmájában határoztuk meg. A plazma optikai sűrűségének csökkenését követtük nyomon adenozin-difoszfát (ADP) vagy kollagén hatására fotometrikusan mérve és feljegyezve. A sűrűséggörbe hajlásszögéből következtettünk az aggregáció sebességére (Vmax). A görbének az a pontja, amelynél a legnagyobb fényáteresztőképesség jelentkezett, szolgált az optikai sűrűség („optical density”, O. D.) számításának alapjául. Az eredményeket szemléltető táblázatban megadott EC,, értékek az optikai sűrűségre vonatkoznak. A kollagén adagját lehetőség szerint alacsonyan tartottuk. de úgy. hogy irreverzibilis aggregációt hozzon létre. Az aggregáció kiváltására körülbelül 0,01 ml kollagén oldatot adtunk 1 ml lemezben dús plazmához (kereskedelmi kollagén, Hormonchemie cég készítménye, München). Az ADP adagokat úgy választottuk meg, hogy a Born-féle görbe első szakaszát adják. A szükséges ADP mennyisége körülbelül 1 • 10'2 * * * 6mól/liter volt Kereskedelmi ADP-t használtunk (Boehringer—Mannheim cég készítménye). Grafikusan meghatároztuk azt a hatóanyag mennyiséget, amely a trombocita aggregációt 50%-osan gátolta (EC50). Az eredményeket a következő táblázatban ismertetjük. Vegyület EC» 10-6 mól/liter Kollagén ADP A 50 >100 B 4 20 C 5 15 D 45 >100 E 6,5 25 F 20 20 G 3,5 17 H 2,5 14 I 4 10 K 4,5 12 L 1 10 M 4 22 N 0,6 3,0 O 0,2 0,5 P 0,2 1,8 Q 3,6 40 R 1,5 25 S 1,0 10 T 0,1 6 U 4 15 2. A vérzési idő meghosszabbodásának meghatározása Megjegyzés : Az emberi szervezetnek, valamint a melegvérűeknek van egy olyan fontos mechanizmusuk, amely sebesülés esetén a vérveszteségtől megvédi. Ez a rendszer a vérlemezkékből (trombocitákból) áll, amelyek tapadási tulajdonságaik alapján a véredények sérülését gyorsan ..betapasztják” és így primer hemosztázt váltanak ki. Emellett a tisztán sej (jellegű vérzéscsillapítási mechanizmus mellett a szervezetnek véralvadási rendszere is van. Ebben a rendszerben a plazmafaktorok (fehérjék) olyan formába kerülnek, amely a folyékony plazmafibrinogént 5 csomósán megalvasztja. A primer hemosztáz, amely lényegében a trombocitáknak tulajdonítható, és a véralvadási rendszer kiegészítik egymást abból a célból, hogy a szervezetet hatásosan megvédjék a vérveszteségtől. Számos betegségnél ép véredényrendszer esetén is leját- 10 szódhat a véralvadás, valamint a trombociták összetapadása. A véralvadási hajlam csökkentésére ismert a kumarin és a heparin, és ismert véralvadási vizsgálatokkal könynyen megállapítható, hogy bizonyos szerek a vérzést mennyire nyújtják meg. 15 Mivel sérülés esetén a vérzés első gyors csillapodása a trombocitáknak tulajdonítható, meghatározott sérülés okozásával a trombociták szerepe a vérzési idő mérésével jól meghatározható. Embereknél a rendes vérzési idő körülbelül 1—3 perc, de ennek feltétele az egészséges és meg- 20 felelő számú trombocita jelenléte. Tehát szokásos trombocitaszám esetén a vérzési idő meghosszabbodása a trombociták szerkezeti zavarát jelzi. Ez például született trombocita működési zavarnál jelentkezhet. Másrészt, ha a trombociták spontán összetapadási hajlamát az artériában 25 bekövetkező véredény-elzáródás kiküszöbölésére gyógyszeresen akarjuk megakadályozni, akkor a trombocitákra hatásos, eredményes gyógymód esetén a vérzési időnek hosszabbnak kell lennie. Tehát trombocitákra hatásos vegyületnél elvátjuk a vérzési idő meghosszabbodását, és — 30 mivel ez az alvadási rendszert nem érinti — normális véralvadási időt. W. D. Keidel : Kurzgefasstes Lehrbuch der Physiologie, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1967, 31. oldal : Der Blutstillungsvorgang. A vérzési idő meghatározásához a vizsgált anyagokat 10 35 mg/kg adagban perorálisan éber egereknek adtuk be. Egy óra múlva minden állat farkának végéből körülbelül 0,5 mm-t lemetszettünk és a vért 30 másodpercenként szűrőpapírral óvatosan felitattuk. Az így kapott vércseppek száma a vérzési idő mértékéül szolgált (kísérletenként 5 állat). 40 A következő táblázatban megadott számadatok a kontrollcsoporttal szembeni százalékos vérzési idő meghoszszabbodást szemléltetik. 45 Vegyület Vérzési idő meghosszabbodása %-ban egy óra múlva A 145 B 102 50 C 26 D 76' E 152 F 91 G 5 55 H 29 I >300 K 12 L 15 M 27 60 O 73 P 12 Q 39 R 30 T 5 65 U 33 4
