177272. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amfoter polién antibiotikumok N,N,N- trimetil-származékainak előállítására
3 177272 4 A Körber szerint feldolgozott vizsgálati eredményekből az adódott ki, hogy az N,N,N-trimetil-amphotericin B és az N,N,N-trimetil-nystatin különböző mennyiségei toxicitásuk alapján egymáshoz igen közel állnak. Ezen preparátumok LDa értékei 60,6 és 100 mg/kg között vannak, a középérték 80,2 + 7,0 mg/kg. Az amphotericin B és a nystatin N,N,N-trimetil-származéka 10—15-ször kisebb toxicitásúnak mutatkozott, mint a kiindulási antibiotikumok, melyeknek a megfelelő, polivinilpirrolidonnal képezett komplexei 7,0, illetve 11,0 mg/kg-os LDffl értéket adtak. Az N,N,N-trimetil-mykoheptin toxicitása - a polivinilpirrolidonnal alkotott vízben oldódó komplex alakjában egereknek intravénásán beadva - 50—85 mg/kg volt. Ez tiszta N,N,N-trimetil-mykoheptinre vonatkoztatva LD5o = 10—17 mg/kg értéknek felel meg. A kiindulási mykoheptin LDa-értéke 1,2—1,7 mg/kg. A találmány szerinti eljárással előállítható N,N,N-trimetil-származék toxicitása tehát - azonos biológiai hatás mellett - az eredeti toxicitás egy tizede. Az N,N,N-trimetil-amphotericin B 5 mg/kg dózisban nyulaknál nem vált ki 1 °C-nál nagyobb rektális hőmérséklet emelkedést. Az amfoter polién antibiotikumok N,N,N-trimetil-származékai kémiai-gyógyászati aktivitásának vizsgálatát fehéregerek generalizált candidiasis megbetegedésén mint modellen végeztük. Az állatok fertőzésére az oltóanyagot 48-órás Candida albicans kultúrából állítottuk elő, és azt 10 12 millió sejt/egér dózisban intravénásán adtuk be. A vizsgálatokban mindkét nemű, 18- 20 g súlyú fehéregereket alkalmaztunk. Az amfoter polién antibiotikum N,N,N-trimetil-származékát polivinilpirrolidonnal képezett vízoldható komplexe formájában, amely 22—29% hatóanyagot tartalmaz, 5%-os glükóz-oldatban oldottuk fel, és minden 24 órában egyszer, intravénásán adtuk be. A preparátumok effektivitás-kritériumaként a különböző csoportokban levő állatok életben tartását tekintettük a fertőzött, de kezelés alá nem vont állatok csoportjához viszonyítva. Az amphotericin B és a nystatin N,N,N-trimetil-származékával a kezelést egy 4—5 napig tartó, és közben egy 48 órás szünettel megszakított, valamint egy megszakítatlan, hetes kúrával végeztük. A különböző vizsgálatok során az összes kontroll állat elpusztult a 9. és a 16. nap között. Erre az időre abban az egér-csoportban, amelyet az 1. kezelési séma szerint 10 és 20 mg/kg N,N,N-trimetil-amphotericin B-vel kezeltünk, az állatok 94—100%-a életben maradt. A vizsgált dózisok közül a legkisebb, az 1 mg/kg-os, az állatok 50%-át tartotta életben. Az egerek generalizált candidiasisának N,N,N-trimetil-amphotericin B-vel a kihagyásos kezelési séma szerint történő kezelésénél kapott eredményeket a II. táblázatban adjuk meg. II. táblázat Egérszám a csoportban Dózis mg/kg Az elpusztult egerek száma 2 hét múlva 3 hét múlva 4 hét múlva 16 20 1 1 1 16 10 0 2 2 16 5 5 6 7 16 1 8 9 9 16 0 14 16 16 A fertőzés kifejlődésére a folyamatos kezelési séma szerinti kezelés esetén már 0,1—0,2 mg/kg bevitele alkalmával kifejezett hatás volt megállapítható. A III. táblázat szemlélteti az egerek generalizált candidiasisának N,N,N-trimetil-amphotericin B-vel a folyamatos kezelési séma szerinti kezelésénél kapott eredményeket. III. táblázat Egérszám a csoportban Dózis mg'kg Az elpusztult egerek száma 9 nap múlva 2 hét múlva 3 hét múlva 4 hét múlva 16 0,8 8 8 9 10 31 0,4 11 13 15 19 31 0,2 19 22 27 29 16 0,1 10 13 14 15 16 0,05 11 14 15 16 16 0,025 16 16 16 16 31 0,0 31 31 31 31 Az N,N,N-trimetil-nystatinnal történő kezelést szintén kétféle kezelési séma szerint végeztük. A kihagyó séma szerinti kezelésnél arra az időre, mikorra a kontroll csoport összes állata elpusztult, azon állatok életben maradása, amelyek a preparátumot kapták 25—87%-ot tett ki a dózis nagyságától függően. Az egerek generalizált candidiasisának N,N,N-trimetil-nystatinnal, a kihagyó kezelési séma szerinti kezelése esetén kapott eredményeket a IV. táblázat tartalmazza. IV. táblázat Egérszám a csoportban Dózis mg/kg Az elpusztult egerek száma 2 hét múlva 34iét múlva 4 hét múlva 16 40 2 2 2 16 20 5 5 5 16 10 10 10 10 16 5 10 12 12 16 0 14 16 16 Hasonló eredményeket kaptunk a hét nap alatt, naponta történő preparátum-beadás esetén is. Az egerek generalizált candidiasisának N,N,N-trimetil-nystatinnal, a folyamatos kezelési séma szerinti kezelésénél kapott eredményeket az V. táblázat adja meg. V. táblázat Egérszám a csoportban Dózis mg/kg Az elpusztult egerek száma 2 hét múlva 3 hét múlva 4 hét múlva 20 10 7 10 13 19 5 7 10 12 18 2,5 11 14 16 20 1,0 16 18 20 30 0,0 28 30 30 Mindkét preparátum nagyobb dózisokkal történő kezelés esetén viszonylag stabil eredményt adott, mivel az állatok életben maradása annak négy hétig tartó megfigyelése alatt gyakorlatilag változatlan maradt. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
