177272. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amfoter polién antibiotikumok N,N,N- trimetil-származékainak előállítására
5 177272 6 A találmány szerint az amfoter polién antibiotikumok (I) általános képletű N,N,N-trimetil-származékainak előállítására szolgáló eljárás — az (I) általános képletben R az amphotericin B, a nystatin vagy a mykoheptin karboxil-csoport nélküli aglikonját jelenti — abban áll, hogy a megfelelő antibiotikumot az aminocsoportjában kimerítően metilezzük metilezőszerrel végzett reagáltatás útján. Metilezőszerként például metilhalogenideket, metilszulfátot vagy szerves szulfonsavak metilészterét alkalmazhatjuk. Az eljárást szerves oldószeres közegben foganatosítjuk, utána a végterméket elkülönítjük. Metilezőszerként előnyösen metiljodidot vagy dimetilszulfátot alkalmazunk. Kívánatos az eljárást dimetilszulfoxidos vagy dimetilformamidos közegben végrehajtani. A metilezési folyamat során képződő sav megkötésére ezt a reakciót nátrium-hidrogén-karbonát jelenlétében hajtjuk végre, amelyet 0,5—2,5:1 súlyarányban veszünk. A metilezési reakciót célszerűen 25—45 °C hőmérsékleten hajtjuk végre. A találmány szerinti eljárást a következőképpen valósítjuk meg. Az amfoter polién antibiotikumot szerves oldószerben feloldjuk. E célra előnyös oldószer a dimetilszulfoxid, illetve a dimetilformamid, mivel ezekben az oldószerekben a polién antibiotikum jól oldódik, ezenkívül ezek az oldószerek hozzájárulnak ahhoz, hogy a metilezési reakció a legtökéletesebben menjen végbe. A kapott oldathoz keverés közben hozzáadjuk a metilezőszert, amikoris ilyenként metilhalogenideket. kénsavmetilésztert vagy szerves szulfonsavak metilésztereit, például metiljodidot, dimetilszulfátot vagy a p-toluolszulfonsav metilészterét alkalmazhatjuk többek között. A metilezési folyamat során az amino-csoport protonjainak metil-csoporttal való helyettesítése következik be, miközben a megfelelő sav felszabadul. A felszabaduló sav megkötésére célszerű az eljárást nátrium-hidrogén-karbonát jelenlétében végrehajtani, amit előnyösen a kiindulási antibiotikumhoz képest 0,5 illetve 2,5:1 súlyarányban alkalmazunk. A nátrium-hidrogén-karbonát megköti a kilépő savat, így a reakcióegyensúly feltételeit a végtermék képződésének irányába tolja el. A metilezési folyamat az amino-csoport nitrogénatomján három metil-csoport megkötésével fejeződik be, és a nitrogénatom eközben pozitív töltést nyer. Ily módon a nyert vegyület belső komplexet képez, amely a kvaterner nitrogénatomon pozitív, a teljesen ionizált karboxil-csoporton pedig negatív töltést hordoz. Célszerű a metilezési reakció melléktermékei képződésének csökkentésére a reakciót a reakcióelegy 25—45 C hőmérsékletre való felmelegítésével végrehajtani. A képződött végterméket vízzel történő kicsapás, majd azt követő centrifugálás, mosás és szárítás útján izoláljuk. A végtermékre számított kitermelés az elméleti érték 70—90%-át éri el. A találmány szerinti eljárás jobb megvilágítása érdekében a további részleteket a polién amfoter antibiotikumok N,N,N-trimetil-származékainak előállítására irányuló kiviteli példákkal mutatjuk be. 1- példa Keverővei ellátott lombikba 1,5 g 382 nm-nél E'iTM= 1500 extinkcióval rendelkező amphotericin B-t mérünk be. Ezután 40 ml dimetilszulfoxidot öntünk hozzá, és addig keverjük, amíg az amphotericin B teljesen fel nem oldódik. A kapott oldathoz 0,7 g nátrium-hidrogén-karbonátot adunk, majd olyan oldatot öntünk hozzá, amely 10 g dimetilszulfoxidban 1 g metiljodidot tartalmaz. A lombikban levő reakcióelegyet elkeverjük, és 40—45 C hőmérsékleten 1,5—2 órán át tartjuk. Ezután lehűtjük a lombikot, és a tartalmát vízzel kicsapjuk. A csapadékot centrifuga segítségével elkülönítjük, vízzel mossuk, majd acetonnal eltávolítjuk a vizet belőle, végül vákuum szárítószekrényben megszárítjuk. 1,2 g 70°,, N,N,N-trimetil-amphotericin B tartalmú terméket kapunk. A tiszta termék UV-spektruma: abszorpciós maximumok 273 + 2, 283 + 2. 345 + 2, 363 + 2,382 ± 2 és 406 ± 2 nm-nél : 382 nm-nél az extinkció 1500. IR-spektrum: 1720 cm-'; 1590 cm-1 (s. erős); 1420 cm“1; 1190 cm“1; 1080 cm-1; 1020 cm“1. 1 g tiszta termék potenciometriás titrálása : 0,1 n kálium-hidroxid-oldat : 0,52 ml, 0.1 n sósav-oldat: 10,1 ml. A termék megoszlási konstansa 2:2:1 arányú metanol-kloroform-(8,27 pH-jú) borát-puífer rendszerben 0,82. 2. példa Keverővei ellátott lombikba 5 g 304 nm hullámhossznál E|”em = 850 extinkcióval rendelkező nystatint mérünk be. Ezután 40 ml dimetilszulfoxidot töltünk hozzá, és keverjük, míg az antibiotikum teljesen fel nem oldódik. A kapott oldathoz 13 g nátrium-hidrogén-karbonátot adunk, majd olyan oldatot öntünk hozzá, amely 6 g dimetilszulfátból és 10 ml dimetilszulfoxidból áll. A reakcióelegyet elkeverjük, és keverés közben 1,5 órán át 30 C-on tartjuk, majd lehűtjük a lombikot, és a tartalmát vízzel kicsapjuk. A csapadékot centrifuga segítségével elválasztjuk, vízzel, majd acetonnal mossuk, és vákuum szárítószekrényben szárítjuk. 3,7 g 68% N,N,N-trimetil-nystatin tartalmú terméket kapunk. A tiszta termék UV-spektruma : abszorpciós maximumok 292 + 2, 304 + 2 és 318 + 2 nm hullámhossznál; 304 nm hullámhossznál az extinkció 800. 1 g tisztított termék potenciometriás titrálása : 0,1 n kálium-hidroxid-oldat: 0,75 ml, 0,1 n sósav-oldat: 9.86 ml. A termék megoszlási konstansa 2:2:1 arányú metanol-kloroform-(8,27 pH-jú) borát-puífer rendszerben 1,25. 3. példa Keverővei ellátott lombikba 5 g 382 nm hullámhossznál Ej"Cm = 1200 extinkcióval rendelkező mykoheptint mérünk be. Ezután 80 ml dimetilszulfoxidot töltünk hozzá, és addig keverjük, míg az antibiotikum teljesen fel nem oldódik. A kapott oldathoz 3,0 g nátrium-hidrogén-karbonátot adunk, majd olyan metilező oldatot töltünk hozzá, amely 20 ml dimetilszulfoxidban 3,5 g p-toluolszulfonsav-metilésztert tartalmaz. A reakcióelegyet 1,5 órán át 35 °C-on keveijük, majd lehűtjük és a terméket az 1. példában leírt módon izoláljuk. 4,2 g 56% N,N,N-trimetil-mykoheptin tartalmú terméket kapunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
