177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
17 177134 18 szárítjuk, majd bepárlás után a védett pentapeptidet (Rf =0,63) éterrel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Súlya: 0,4g. Ezt Imi 8n sósavas dioxánban feloldjuk, 15 perc múlva a szabad pentapeptidet (Rf = 0,47) 30 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük és 10 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, az oldat pHját trietilaminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,4 g (1 mmól) Boc—Val—OPFP-t. Egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 20 ml kloroformban oldjuk, majd az oldatot 10—10 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett hexapeptidet (Rf = 0,65) 30 ml éterrel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Ezután 1,5 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és 15 perc múlva a szabad hexapeptidet (Rf = 0,48) 30 ml száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és 10 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t . 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 0,45 g (1 mmól) Boc-Arg(N02 )—OPFP-t. Egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 10—10 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 20 ml éter : etanol = 9:1 eleggyel eldörzsöljük és leszűqük. így 0,45 g (11,3%) védett heptapeptidet kapunk. Rf=0,38, op.: 199-203 °C (bomlás közben). 2. lépés Z—OGly—Arg(N02 )—V al—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— -Pro—Thr(Me)—OMe 0,45 g (0,34 mmól) Boc-Arg(N02)—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro—Thr(Me)—OMe-t 2 ml 8 n sósávas dioxánban feloldunk, 15 perc múlva a szabad heptapeptidet (Rf = 0,35) száraz éter hozzáadásával izoláljuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,4 g (1 mmól) Z—OGly—OPFP-t. Egy óra múlva a reakcióelegyet 30 ml kloroformmal hígítjuk és 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett peptidet 20 ml éter : etanol = 9:1 eleggyel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Termelés: 0,45 g (93%), op.: 158-162 °C, Rf = 0,44. 50 3. lépés A védőcsoportok eltávolítása 55 0,45 g (0,31 mmól) Z—OGly-Arg(N02 )—Val-Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)-Pro-Thr(Me)—OMe-t 1,5 ml dimetilformamidban feloldunk, és hozzáadunk 1 ml 2-merkaptoetanolt. Egy óra múlva az anyagot 60 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, 60 20 ml metanolban oldjuk, kevés csontszénnel derítjük, majd bepároljuk. A maradékot 30 ml éterrel eldörzsöljük és szűrjük. A kapott Z—OGly-Arg(N02 )—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His—Pro—Thr(Me)—OMe súlya: 0,38 g (98%), Rf =0,16, Rf =0,52. Ezt az 65 anyagot 5 ml dioxánban szuszpendáljuk és hozzáadunk 1,2 ml n nátriumhidroxid-oldatot. Egy óra múlva az oldat pH-ját n sósavval 3-ra állítjuk, az oldószert elpárologtatjuk és a kivált csapadékot 5 20 ml kloroform : dimetilformamid = 3:1 eleggyel extraháljuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a C-terminálison szabad peptidet 20 ml éterrel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Súlya: 0,26 g (70%), Rf =0,25. Ezután az 10 anyagot 10 ml metanol : ecetsav : víz = 5 :1 :1 elegyben feloldjuk, hozzáadunk 0,1 g 10%-os csontszenes palládiumot, és keverés közben 16 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. Vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzés után a katali- 15 zátort kiszűq'ük, és az oldatot szárazra pároljuk. 50 ml etanol : víz = 9 :1 elegyet adunk a maradékhoz, újból szárazra pároljuk, majd ezt a műveletet 50—50 ml vízzel még kétszer megismételjük. így 0,16 g (80%) [hidroxiacetil1, Thr(Me)]-angioten- 20 zin-II-t kapunk, amelyet a fentiekben megadott módon tisztítunk. Rf =0,22, Rf = 0,53, Rf =0,50, Egiu(pH = 1,9) = 0,98, aminosav-analízis: Thr: 0,6 (1), Pro: 1,0 (1), Val: 1,0 (1), Ile: 1,02 (1), Tyr: 0,85 (1), His: 1,0 (1), Arg: 0,96 (1). 25 7. példa 30 (Hidroxiacetil1, Ile8 )-angiotenzin-II-diacetát előállítása 100 mg (hidroxiacetil1, Ile8)-angiotenzin-II oktapeptidet — amelyet a 3. példában leírt módon 35 állítottunk elő — 20 ml 0,5 mólos vizes ecetsavoldatban oldunk és az oldatot liofilizáljuk. Ily módon az oktapeptid diacetát-sóját kapjuk, amelyben a peptidtartalom az ibolyántúli spektrum alapján meghatározva 88,5%, op.: 232—236 °C. 40 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az X—Arg—V al—Tyr—Ile —His—Pro—Y I I általános képletű peptidek - e képletben az aminosavak L-konfigurációjúak, X valamely, a-helyzetben hidroxilcsaportot tartalmazó 2—5 szénatomos alkánkarbonsav gyökét, előnyösen hidroxiacetil- vagy 1-a-hidroxipropionilcsoportot és Y L-leucil-, L-izoleucil-, L-alanil- vagy L-O-metil-treonil-csoportot jelent — valamint azok savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely H—Arg(A)—Val—Tyr(B)—Ile-His(E)—Pro—Y—OG II II általános képletű reakcióképes heptapeptid-származékot, ahol A jelentése az Arg guanidincsoportjának átmeneti megvédésére alkalmas, előnyösen nitro- vagy tozilcsoport, 9
