177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
IS 177134 16-oldattal kirázzuk. Vízmentes nátriumszuiíattal történő szárítás és bepárlás után a védett hexapeptidet (Rf = 0,65) éterrel szilárdítjuk, szüljük, 10 ml éterrel mossuk. Ezután 8 ml B n sósavas dioxánban feloldjuk és 20 perc elteltével a szabad hexapeptidet (Rf = 0,65) 50 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük és 20 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 2,9 g (6 mmól) Boc-Arg(N02)-OPFP-t. 20 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 40 ml kloroformban oldjuk, majd az oldatot 20 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal és 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 30 ml etilacetát : éter = 1:2 eleggyel eldörzsöljük, szűrjük és 10ml ugyanilyen eleggyel mossuk. Az így kapott védett heptapeptid súlya: 2,0 g (72%), op.: 185—187 °C. Rf = 0,70. 2. lépés Z—OGly —Arg(N02 )—V al—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— -Pro—Ala—ONB 1,35 g (1 mmól) Boc-Arg(N02 )-Bal-Tyr(Bzl> —He—His(Dnp)-Pro—Alá—ONB-t oldunk 4 ml 8n sósavas dioxánban, 15 perc múlva a szabad heptapeptid-hidrokloridot (Rf = 0,63) száraz éterrel kicsapjuk, szüljük és éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 15 ml dimetilformamidban, a pH-t trietilaminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,96 g (2,5 mmól) Z-OGly-OPFP-t. 20 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett pepiidet 20 ml etanollal eldörzsöljük, leszűrjük és 10 ml etanollal mossuk. Termelés: 1,16 g (83%), op.: 133-135 °C, Rf =0,72. 3. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,5 g (1 mmól) Z-0Gly-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)-Ile—His(Dnp)—Pro—Alá—ONB-t 5 ml dimetilformamidban feloldunk, hozzáadunk 2,95 ml 2-merkaptoetanolt, majd 1 óra múlva 100 ml száraz éterrel az anyagot kicsapjuk, szüljük és 20 ml etanollal mossuk. Így 1,1 g (82%) Z-OGly-Arg(N02)-Val—Tyr(Bzl)-Ile—His-Pro-Ala-ONB-t nyerünk, Rf =0,15, Rf =0,40. Ezt a védett pepiidet 15 ml metanol : ecetsav : víz = 5 :1 :1 elegyben oldjuk, hozzáadunk 0,5 g 10%-os csontszenes palládiumot, és keverés közben 24 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. A reakció végét vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrizzük. Ekkor a katalizátort kiszűqük, 15 ml metanol : ecetsav : víz = 5 :1 :1 eleggyel mossuk, az oldatot szárazra pároljuk. A maradékhoz 100 ml etanol : víz = 9:1 elegyet adunk, újból szárazra pároljuk, majd ezt a műveletet 100-100 ml vízzel még kétszer megismételjük. A maradékot 20 ml száraz etanollal eidörzsöljük és szűréssel izoláljuk a terméket. így 0,55 g (80%) hidroxiacetil1, Alá8 )-angiotenzin-II-höz jutunk, amelyet a fentiekben megadott módon tisztítunk. Rf =0,28, Rf =0,48, Rf =0,50, EGiu(pH-l,9)= 1,0, Aminosav-analízis: Pro: 0,95 (1), Alá: 1,1 (1), Val: 1,0 (1), Ile: 1,0 (1), His: 1,0 (1), Arg: 1,0 (1), Tyr: 0,9 (1). 6. példa (Hidroxiacetil1, Thr /Me/8 )-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ife-His(Dnp)—Pro—Thr(Me)—OMe 0,69 g (3 mmól) Thr(Me)-OMe • HBr-t 30 ml kloroformban feloldunk, hozzáadunk 0,42 ml trietilamint és 1,7 g (4,5 mmól) Boc—Pro—OPFP-t. 2 óra múlva az oldathoz hozzáadunk 0,33 ml N, N-dimetilaminoetilamint, majd 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 10—f%ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval, vízzel es 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett dipeptidet (Rf =0,76) izolálás nélkül 2 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, majd 15 perc múlva az oldatot 20 ml éterrel hígítjuk és bepároljuk. A maradék szabad dipeptidet (Rf = 0,18) 20 ml kloroformban feloldjuk, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 2,6 g (4,5 mmól) Boc—His(Dnp)-OPFP-t. Két órai szobahőmérsékleten történő keverés után az oldathoz O, 22 ml N,N-dimetilaminoetilamint adunk, majd 15 perc múlva 10—10 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a szabad tripeptidet (Rf = 0,5) izolálás nélkül 4 ml 8 n sósavas dioxánban oldjuk, és 15 perc múlva a szabad tripeptidet (Rf = 0,3) 30 ml száraz éterrel kicsapjuk, szüljük és 10 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 20 ml kloroform : dimetilformamid = 1:1 elegyében, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 1,6 g (4 mmól) Boc-Ile—OPFP-t. 30 perc után az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml etilacetátban oldjuk, majd 15—15 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után4 30 ml éter : n-hexán = 1:9 eleggyel eldörzsöljük, leszűijük és 10 ml ugyanilyen eleggyel mossuk, a védett tetiapeptidet (Rf = 0,64). Ezt 7 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk és 15 perc múlva a szabad tetrapeptidet (Rf = 0,27) 50 ml száraz éterrel kicsapva feszüljük. Azonnal feloldjuk 20 ml kloroform : dimetilformamid = 1:1 elegyben, trietiíaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 1,6 g (3 mmól) Boc-Tyr(Bzl)~OPFP-t. 30 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml etilacetátban oldjuk és 0,22 ml N,N-dimetilaminoetilamint adunk az oldathoz. 15 perc múlva az oldatot 10-10 ml 10%-os vizes citromsavoldattal, n’sósavval és vízzel kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
