177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
13 177134 14 száraz etanollal eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. így 0,48 g (64,5%) (hidroxiacetil1, Ile8)-angiotenzin-II-t kapunk, amelyet a megadott módon tisztítunk. Rf =0,29, R8 =0,57, Rf =0,58. EgiuÍpH = 1>9)= 1»03. Aminosav-analízis: Pro: 0,99 (1), Val: 1,15 (1), Ile: 2,06 (2), Tyr: 0,74 (1), His: 0,98 (1), Arg: 0,95. 4. példa (L-a-hidroxipropionil1 ,Iles )-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Z—OAla—Arg(N02)—Val—Tyr(Bzl)-Ile—His(Dnp)— —Pro—Ile—ONB 1,6 g (1,1 mmól) Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl> —Ile—His(Dnp)-Pro—Ile—ONB-t 8 ml 8 n sósavas dioxánban feloldunk és 15 perc múlva a szabad heptapeptidet (Rf = 0,45) száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük, 15—15 ml éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,61 g (15 mmól) Z-OAla-OPFP-t. 30 perc után az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 15 ml n sósavval, majd 15 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett pepiidet Rf = 0,63/50 ml éter segítségével szilárdítjuk és szűréssel izoláljuk. Termelés: 1,4 g (82%). Op.: 164-168 °C. 2. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,4 g (0,9 mmól) Z-OAla-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)—He—His(Dnp)—Pro—Ile—ONB-t 5 ml dimetilformamidban feloldunk, és hozzáadunk 3,5 ml 2-merkaptoetanolt. Egy óra múlva az anyagot 100 ml éter hozzáadásával kicsapjuk, majd tisztítás céljából 20 ml metanolban oldjuk és 60 ml éterrel újból kicsapjuk. így 0,8 g (65%) Z-OAla-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)~Ile-His-Pro-Ile-ONB-t kapunk. Rf =0,13, Rf =0,27. Ezt a védett pepiidet feloldjuk 10 ml metanol : ecetsav : víz = 5:1:1 elegyben, hozzáadunk 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátort, és keverés közben 16 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, és az anyagot 30 ml vízmentes etanollal eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. így 0,4 g (0,65) (L-a-hidroxipropionil1-Ile8 )-angiotenzin-II-t kapunk, amelyet a megadott módon tisztítunk. Rf = 0,30, R?=0,58, Rf = 0,58, EGUr (pH= 1,9)= 1,07, Aminosav-analízis: Pro: 1,04 (1), Val: 0,98 (1), Ile: 1,98 (2), Tyr: 0,98 (1), His: 1,05 (1), Arg: 1,0 (1). 5. példa (Hidroxiacetil1, Ala2 * * * * * 8)-angiotenzin-H előállítása 5 1. lépés Boc—Arg(N02 )—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— 10 —Pro—Ala—ONB 1,21g (4 mmól) Ala—ONB • HBr 15 ml kioroformos oldatához hozzáadunk 0,56 ml trietilamint és 0,76 g (2 mmól) Boc—Pro—OPFP-t. 20 perces 2 j szobahőmérsékleten történő keverés után az oldatot 10 ml vízzel és 10 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A védett dipeptidet (Rf = 0,64) izolálás nélkül 4 ml 8 n sósavas dioxán- 2Q ban feloldjuk, 10 perc múlva az oldatot 20 ml éterrel hígítjuk, majd bepároljuk. A szabad dipeptidhidrokloridot (Rf =0,65) 15 ml kloroformban feloldjuk, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 1,76 g (3 mmól) Boc—His(Dnp)—OPFT-t. 25 30 perc után az oldathoz 0,44 ml N,N-dimetilaminoetilamint adunk, és 5 perc múlva 10—10 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett tripeptidet (Rf = 0,57) izolálás nélkül 4 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és a szabad tripeptidet (Rf = 0,28) 10 perc múlva 50 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük és 10 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 20 ml kloroform : dimetilformamid =1:1 elegyében, trietilaminnal a 35 pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 1,58 g (4 mmól) Boc-Ile-OPFP-t. 20 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml etílacetátban oldjuk, majd az oldatot 15—15 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett tetrapeptidet (Rf = 0,57) 30 ml éter ^-hexán = 1:1 eleggyel eldörzsöljük és szűrjük. Ezután 4 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk és 15 perc múlva a szabad tetrapeptidet (Rf = 0,38) 50 ml 45 száraz éterrel kicsapjuk, szüljük, mossuk. Azonnal feloldjuk 15 ml kloroform : dimetilformamid = 2:1 elegyben, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 1,66 g (3 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OPFP-t. 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk a mara- 50 dékot 40 ml etilacetátban oldjuk, hozzáadunk 0,22 ml N ,N-dimetilaminoetilamint, majd 5 perc elteltével 20—20 ml 10%-os citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett 55 pentapeptidet (R? = 0,60) 30 ml éterrel eldörzsöljük, szűrjük és 10 ml éterrel mossuk. Ezután feloldjuk 4 ml 8 n sósavas dioxánban, 10 perc múlva a szabad pentapeptidet (Rj = 0,62) 30 ml éterrel kicsapjuk, szűrjük, 10 ml száraz éterrel mossuk. 50 Azonnal feloldjuk 20 ml kloroform : dimetilformamid = 1:1 elegyében, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 1,6 g (4 mmól) Boc—Val-OPFP-t. 20 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a marad Scot 40 ml etilacetátban oldjuk, az ol>5 datot 20 ml vízzel és 20 ml 10%-os vizes citromsav-7
