177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
11 177134 12 3. példa (Hidioxiacetil1, Ile8)-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc-Arg(N02VVal-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)—Pro—Ile—ONB 4,15 g (15 mmól) Ue-ONB • HC1 50 ml kloroformos oldatához hozzáadunk 2,1 ml trietilamint és 3,81 g (10 mmól) Boc-Pro-OPFP-t. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 20 percen át keverjük, ezután 30 ml vízzel, majd 30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A védett dipeptidet (Rf = 0,9) izolálás nélkül 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, majd 10 perc múlva a reakcióelegyet 60 ml száraz éterrel hígítjuk és bepároljúk. A szabad dipeptid-hidrokloridot (Rf = 0,44) 30 ml kloroformban feloldjuk, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 8,8 g (15 mmól) Boc—His(Dnp)-OPFP-t. Másfél óra múlva a reakcióelegyhez 1,65 ml N,N-dimetilaminoetilamint adunk, 15 perc múlva 20—20 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. A védett tripeptidet (Rf = 0,50) izolálás nélkül 20 ml 8 n sósavas dioxáriban feloldjuk, 15 perc múlva a szabad tripeptidet Rf = 0,25 (120 ml száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és 30—30 ml száraz éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml kloroform és 20 ml dimetilformamid elegyében, trietil-aminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 6,0 g (15 mmól) Boc-Ile-OPFP-t, 30 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 30—30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett tetrapeptidet 100 ml n-hexán : éter = 9:1 eleggyel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Ezután a védett tetrapeptidet (Rf = 0,65) 25 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, 30 perc után a szabad tetrapeptidet (Rf =0,41) 120 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük és 30-30 ml éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 70 ml dimetilformamid•kloroform = 1:1 elegyben, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 6,0 g (11,5 mmól) Boc—Tyr(Bzl)-OPFP-t. 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk és 0,66 ml NJí-dimetilaminoetilamint adunk hozzá. 15 perc múlva 30—30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett pentapeptidet (Rf = 0,59) 100 ml száraz éter .hozzáadásával szilárdítjuk és szűréssel izoláljuk. Ezután 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és 15 perc múlva a szabad pentapeptid-hidrokloridot (Rf = 0,4) 120 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük, 20 ml száraz éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 4,62 g (12 mmól) Boc-Val-OPFP-t. Egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 30-30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal’, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 100 ml száraz éterrel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk a védett hexapeptidet (Rf =0,56). Ezután 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk és 15 perc múlva a szabad hexapeptidet (Rf = 0,47) 1 2 0 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük, 20 ml száraz éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 5,38 g (12 mmól) Boc— —Arg(N02 )—OPFP-t. 30 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100.ml kloroformban oldjuk és az oldatot 40 ml n sósavval, majd 40 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett heptapeptidet 100 ml etanollal szilárdítjuk és szűréssel izoláljuk. Termelés 9,7 g (68%) a kiindulási Boc-Pro—OPFP-re számítva (Rf = 0,67). 2. lépés Z—OGly—Arg(N 02 )—V al—Ty r(Bzl)—Ile—His(Dnp)— —Pro-Ile—ONB 1,6 g (1,1 mmól) Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)—He—His(Dnp)—Pro—Ile—ONB-t 8 ml 8n sósavas dioxánban feloldunk és 15 perc múlva a szabad heptapeptid-hidrokloridot (Rf = 0,45) 50 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szüljük, 20 ml száraz éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,6 g (1,5 mmól) Z—OGly—OPFP-t. 30 perc múlva az. oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 30 ml n sósavval, majd 30 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után 50 ml száraz éterrel szilárdítjuk és szűréssel izoláljuk a védett pepiidet. Termelés: 1,45 g (85%), op.: 151-158 °C, Rf =0,68. 3. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,45 g (0,94 mmól) Z-OGly-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)—Pro—Ile—ONB-t 5 ml dimetilformamidban feloldunk, hozzáadunk 3,5 ml 2-merkaptoetanolt és 1 órai keverés után a Z-OGly-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His—Pro—Ile—ONB-t 150 ml száraz éter hozzáadásával lecsapjuk. A csapadékot 20 ml metanolban oldjuk és 60 ml éterrel újból lecsapjuk. így 1,05 g (82%) peptidet kapunk (Rf = 0,10). Ezt az anyagot 30 ml metanol : ecetsav : víz = 5 :1 :1 elegyében oldjuk, hozzáadunk 0,5 g 10%-os csontszenes paUádium katalizátort, és erőteljes keverés közben 21 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. A reakció előrehaladtát vékonyrétegkromatográfiásan eUenőrizzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot szárazra pároljuk, és a szabad peptidet 50 ml 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
