177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
9 177134 10 pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 4,8 g (10 mmól) Boc—Arg(N02 )—OPFP-t. 30 perc után az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 30 ml n sósavval, majd 30 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 100 ml etanollal eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk a védett heptapeptidet (Rf =0,8). Termelés 7,6 g (53% a kiindulási Boc—Pro—OPFP-re számítva). Op.: 192-195 °C. 2. lépés Z—OGly—Arg(N02)—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— —Pro—Leu—ONB 1,8 g (1,25 mmól) Boc-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro—Leu—ONB-t 10 ml ,8 n sósavas dioxánban feloldunk és 15 perc múlva a szabad heptapeptid-klórhidrátot 50 ml száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük 20 ml száraz éterrel mossuk (Rf = 0,36). Azonnal feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 0,9 g (2,3 mmól) Z—OGly-OPFP-t, 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk, az oldatot 20 ml n sósavval, majd 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 50 ml etanol : éter = 2:8 eleggyel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk. Termelés: 1,6 g (85%). Op.: 165-174 °C. Rf = 0,80, 3. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,6 g (1,0 mmól) Z-OGly-Arg(N02)-Val-Tyr-(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro-Leu-ONB-t feloldunk 5 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 3,5 ml 2-merkaptoetanolt. Az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 100 ml száraz éter hozzáadása után a kivált anyagot szűrjük, 10—10 ml éterrel kétszer mossuk, majd metanolban oldva éterrel történő lecsapással tisztítjuk. A kapott Z—OGly—Arg(N02 )—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His-Pro—Leu—ONB súlya: 1,3 g (95%). Rf = 0,2. Ezt a peptidet 30 ml metanol : ecetsav : víz = 5 :1 :1 elegyben feloldjuk, hozzáadunk 0,5 g 10%-os csontszenes palládiumot, és intenzív keverés közben 20 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. A reakció előrehaladtát vékonyrétegkromatográfíásan ellenőrizzük. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, 20 ml metanol : ecetsav : víz = 5:1:1 eleggyel mossuk és az oldatot szárazra pároljuk. A maradékot az ecetsav eltávolítása céljából etanol—víz eleggyel többször bepároljuk. A peptidet ezután 50 ml száraz etanollal eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk, szűrjük. Termelés: 0,8 g (67%) hidroxiacetil1,|Leu8)-angiotenzin-II, amelyfiek a tisztítását az előzőekben megadott módon végezzük. Rf =0,41, Rf = 0,59, Rf = 0,60, EGiu (glutaminsavhoz viszonyított elektroforézises mozgékonyság, pH = 1,9) = 0,98. Aminosav-analízis . Pro: 1,0 (1), Val: 1,01 (1), Ile: 1,02 (1), Arg: 1,01 (1), His: 1,0 (1), Leu: 1,02 (1), Tyr: 0,73 (1). 2. példa (L-a-hidroxipropionil1, Leu3 * * * * 8)-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Z—OAla—Arg(NQj )—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— —Pro—Leu—ONB 1,8 g (125 mmól) Boc—Arg(N02 )-Val—Tyr(Bzl)-Ile—His(Dnp)-Pro-Leu—ONB-t lásd 1. példa 1. lépés, 8 ml 8 n sósavas dioxánban feloldunk, majd a szabad heptapeptidet 80 ml száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és 30 ml száraz éterrel mossuk (Rf =0,36). Azonnal feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,93 g (2,3 mmól) Z-0Alá—OPFP-t. 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk és az oldatot 20 ml n sósavval és 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 50 ml etanol-éter = 4:1 eleggyel eldörzsöljük és szűréssel izoláljuk az anyagot. Termelés: 1,75 g (93%). Op.: 164-172 °C, Rf =0,85. 2. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,6 g Z—OAla—Arg(N02 )—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro—Leu—ONB-t 5 ml dimetilformamidban feloldunk, hozzáadunk 3,5 ml 2-merkaptoetanolt és 1 órai szobahőmérsékleten történő keverés után az anyagot 120 ml száraz éterrel kicsapjuk, szüljük, metanolban oldjuk és éterrel ismét kicsapjuk. Termelés 1,3 g (92%) Z-OAla—Arg(N02 )-Val—Tyr(Bzl)—Ile—His—Pro—Leu—ONB. Rf =0,27. Ezt a peptidet 30 ml metanol : ecetsav : víz = 5:1:1 elegyben feloldjuk, hozzáadunk 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátort és intenzív keverés közben 20 órán át hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. Kromatográfiás ellenőrzés után a katalizátort kiszűrjük, mossuk és az oldatot szárazra pároljuk, azután 100 ml etanol : víz = 9 :1 elegyet adunk a maradékhoz, újból szárazra pároljuk, majd ezt a műveletet 100-100 ml vízzel még kétszer megismételjük. A maradékot 50 ml száraz etanollal eldörzsöljük és leszűrjük, így 0,65 g (L-a-hidroxipropionil1 -Leu8)-angiotenzin-II-t (70%) kapunk. Tisztítását az előzőekben megadott módon végezzük. Rf = 0,36, Rf = 0,57, Rf=0,60, EGhl(pH = 1,9) = 0,97. Aminosav-analízis: Pro: 0,98 (1), Val: 1,0 (1), Ile: 1,1 (1), Arg: 1,0 (1), His: 0,98 (1), Leu: 0,98 (1), Tyr: 0,56 (1). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
