177132. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH hatású terc-butilezett triptfént tartalmazó peptidek előállítására
3 177132 4 —ACTH(1—19) vizsgálata. [J. Blake és C. H. Li: J. Med. Chem: 18 423 (1975)]. Ezek az analógok 0,7%, illetve 1,8% biológiai aktivitást mutattak és az utóbbi adatból az a következtetés volt levonható, hogy a triptofán indolgyűrűjének NH-csoportja vagy mint donor, vagy mint akceptor szerepet játszhat egy hidrogénkötés kialakításában. A triptofánnak, mint töltés-átvivő donornak a szerepét volt hivatott tisztázni a [pentametil—Phe9]—ACTH(1—24) előállítása, amelynek asszociációs konstansa gyakorlatilag azonos volt a megfelelő természetes szekvenciáéval [J. W. van Nispen és G. I. Tesser: Int. J. Peptide Protein Rés. 7., 57. (1975) és J. W. van Nispen és munkatársai: Acta Endocrinologica 84., 470. (1977)], viszont aktivitása mindössze 0,1% volt. A fenti adatokkal merőben ellentétben azt találtuk, hogy ha az ACTH molekulában a 9-es helyzetű triptofánt H—Trp(l’—tBu)—OH-val vagy H-Trp(2’,5\7’-iri—tBu)-OH-val helyettesítjük, ez a biológiai hatást csak kis mértékben csökkenti. Vizsgálataink szerint a [Trp(r-tBu)]9-ACTH(1-19)—NH2 aktivitása 60%-osnak, míg a [Trp(2’ ,5 ’,7 tri—tBu)]9 — ACTH( 1—19)—NH2 aktivitása 40%-osnak adódott, hatásuk azonban tartósabb, mint a természetes aminosav sorrendű fragmenseké. A találmány értelmében úgy állítjuk elő a H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-X-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-NH2 I I általános képletű vegyületek savaddíciós sóit és komplexeit, ahol az egyes aminosavgyökök a glicin kivételével L-konfigurációjúak, hogy valamely Q—Ser—Tyr—Ser—Met—Glu(OR)—His—Phe— —Arg(Q’)-X-Gly-Lys(Q)-Pro-Val-Gly— -Lys(Q)—Lys(Q)—Arg(Q’)-Arg(Q’)-Pro—NH2 II II általános képletű polipeptidről — ahol X ~Trp(l’-terc-butil)-csoportot vagy -Trp(2’,5’,7’-tri-terc-butil)-csoportot jelent, Q azonos vagy eltérő, a peptidkémiában alkalmazott amino-védőcsoportokat, Q’ hidrogénatomot vagy azonos vagy eltérő, a peptidkémiában alkalmazott guanidino-védőcsoportot, előnyösen nitro-csoportot jelent és R a peptidkémiában alkalmazott karboxil-védőcsoportot képvisel - a védőcsoportokat erős savval lehasítjuk és kívánt esetben a kapott savaddíciós sót más, gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóvá vagy komplexszé alakítjuk. A Q. amino-védőcsoport valamely acidolízissel könnyen eltávolítható csoport, így például tritil-, formil-, o-nitro-szulfenil-, benziloxikarbonil-, p-klór-benziloxikarbonilcsoport, különösen terc-butiloxikarbonilcsoport vagy pedig tozil-, trifluoracetil- vagy ftalil-csoport, míg az R karboxilvédőcsoport előnyösen metil-, etil-, terc-butü-, benzilvagy p-klór-benzilcsoport lehet. A védőcsoportokat ismert módon, valamilyen erős savval hasítjuk le, ahol a sav bármilyen, az adott védőcsoport lehasítására alkalmas, erős szerves vagy szervetlen sav lehet. Példaképpen megnevezzük a hidrogénfluoridot, hidrogénbromidot, trifluorecetsavat, metánszulfonsavat. Az új vegyületeket sók formájában kapjuk, amelyek kívánt esetben más, gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sókká alakíthatók. Erre a célra savként mind szervetlen savakat, így sósavat, kénsavat és foszforsavakat, mind szerves savakat, így hangyasavat, ecetsavat, hosszabb szénláncú zsírsavakat, tejsavat, borkősavat, citromsavat és hasonlókat alkalmazhatunk. A reakcióban kiindulási anyagként felhasznált II általános képletű új peptideket önmagában ismert módon, fragmenskondenzációval vagy aminosavankénti lánchosszabbítással állíthatjuk elő. Egy előnyös előállítási mód szerint úgy járunk el, hogy valamely Q-X-B III III általános képletű reakcióképes származékot, ahol Q és X jelentése a fenti és B hidroxilcsoportot, vagy valamely aktiváló csoportot, így halogénatomot, előnyösen klóratomot, pivaloüoxicsoportot, nitro-fenoxi-csoportot, 2,3,5-triklórfenoxi-, pentaklór- vagy pentafluorfenoxicsoportot, N-szukcinimidoxicsoportot vagy azidocsoportot jelent H—Gly-OR IV IV általános képletű származékkal reagáltatjuk, ahol R jelentése a fenti, amennyiben B jelentése hidroxil-csoport, akkor az acilezést előnyösen diciklohexilkarbodiimiddel végezzük és a kapott Q—X—Gly—OR V V általános képletű származékból acidolízissel vagy katalitikus hidrogénezéssel nyert H—X—Gly—OR VI VI általános képletű. származékot Q—Arg(Q’)-B általános képletű vegyülettel, ahol Q és B jelentése a fenti, acilezzük. A kapott Q-Arg(Q’)-X—Gly-OR VII VII általános képletű védett tripeptid származék alkalmas arra, hogy akár a Q csoport ismert módon történő eltávolításával nyert N-terminálison a szabad vegyületet további acilezésnek vessük alá, akár az —R csoport ismert módon történő eltávolításával vele acilezzünk. Eljárhatunk úgy is, hogy a VII általános képletű vegyületről mind a Q, mind az. R védőcsoportot eltávolítjuk és az így kapott H—Arg(Q’)—X—Gly—OH VIII 5 10 15 20 ás 30 35 40 45 50 55 60 65 2
