177098. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptidil ng-karboxi-L-arginin-aldehid-származékok előállítására
9 177098 10 példa 2. lépésében leírt módon előállítjuk az NG-benziloxikarbonil-L-arginin-laktámot, és a kapott dimetilformamidos szuszpenziót az alábbi vegyes anhidridhez adjuk. 7,25 g (20 mmól) terc-butiloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolint [U. Ludescher és R. Schwyzer: Helv. Chim. Acta 55, 2052 (1972)] és 2,22 ml (20 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 20 ml dimetilformamidban. Az oldatot —15°C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 2,64 ml (20 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 5 perc után a fenti dimetilformamidos oldatot. A reakcióelegyet tovább keverjük 1 órán át —15°C-on és 1 órán át 0°C-on. Ezt követően 30 ml benzollal hígítjuk, a kivált sókat kiszűrjük és kétszer 10 ml benzollal mossuk. A benzolos-dimetilformamidos oldatot 50 ml vízzel hígítjuk és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist kétszer 10 ml benzollal kirázzuk, majd az egyesített benzolos oldatokat rendre háromszor 30 ml 10%-os nátrium-karbonáttal, 30 ml vízzel, háromszor 30 ml 0,5 n kénsavval és kétszer 30 ml vízzel mossuk, és vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot 50 ml petroléterrel eldörzsöljük, szüljük, petroléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 9,65 g (76%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,81-0,89. 2. lépés: terc-butiloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolil-NG-benziloxikarbonil-L-arginin-aldehid 9,52 g (15,mmól) védett tripeptid-laktámból (3. példa, 1. lépés) kiindulva az 1. példa 3. lépésében leírt módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a lítium-alumínium-hidrides redukció után a savanyítást 0,5 n kénsavval végezzük. 6,9 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,46-0,56. 3. lépés: terc-butiloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolil-NG-karboxi-L-arginin-aldehid 6,4 g (10 mmól) védett tripeptid-aldehidből (3. példa, 2. lépés) kiindulva az 1. példa 4. lépésében leírt módon járunk el. 5,1 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,46-0,56. [a]f)0 = -64 ±1° (c= 1, sósavval 7-es pH-ra állított vizes oldatban). Aminosav analízis: Phe = 0,96, Arg-H = 0,97 (NH3-ként mérve), Pro= 1,00 (vonatkoztatási alap), Mólsúly az aminosav analízis alapján = 570. Kénsawal felszabadítható CO2% = 10,l. Báriumkarbonátként leválasztható C02% = 3,1. 4. példa Benzoil-D-aUo-izoleucil-L-prolil-NG-karboxi-L--arginin-aldehid előállítása (I képletben X jelentése benzoil-csoport, Y jelentése D-allo-izoleucin-csoport és Pro jelentése L-prolin-csoport 1. lépés: benzoil-D-allo-izoleucil-L-prolil-diciklo-hexil-ammónium-só 150 ml 5—10°C-ra hűtött metilén-kloridban feloldunk 19,2 g (81,5 mmól) benzoil-L-izoleucint [F. Ehrlich: Ber. 37, 1809 (1904)] és 16,5 g (80 mmól) diciklohexil-karbodiimidet. Az oldatot jeges vízhűtés mellett 2 órán át keverjük, majd hozzáadunk 2 ml trietilamint és 100 ml petrolétert. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűijük és kétszer 20 ml petroléterrel mossuk. A szűrletet kétszer 50 ml vízzel, kétszer 50 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és ismét 50 ml vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 80 ml piridinben oldjuk, hozzáadunk 9,2 g (80 mmól) L-prolint és 22,4 ml (160 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet 6 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 100 ml víz és 50 ml éter elegyében oldjuk, a vizes fázist kétszer 20 ml éterrel, és az egyesített éteres fázisokat kétszer 20 ml vízzel mossuk. A vizes fázisokat egyesítjük és 5 n kénsawal pH 2-re savanyítjuk. Az elkülönülő olajos terméket háromszor 50 ml etilacetáttal kirázzuk, az egyesített etilacetát-oldatokat kétszer 20 ml vízzel mossuk és vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 100 ml éterben és hozzáadunk 16 ml diciklohexil-amint. A kivált kristályokat kiszűrjük, háromszor 20 ml éterrel mossuk és tömény kénsav mellett vákuum exszikkátorban szárítjuk. 26,3 g (64%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 117-118 °C. Rf 0,36-0,46 és 0,13-0,23 (diciklohexil-amin). Aminosav analízis: prolin = 1,00 (vonatkoztatási alap), allo-izoleucin = 0,92, izoleucin = 0,02. 2. lépés: benzoil-D-allo-izoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxikarbonil-L-arginin-laktám 8,6 g (22 mmól) terc-butiloxikarbonil-NG-benziloxí-karbonil-L-arginin-laktámból kiindulva az 1. példa 2. lépésében leírt módon előállítjuk az NG-benziloxikarbonil-L-arginin-laktámot, és a kapott dimetilformamidos szuszpenziót az alábbi vegyes anhidridhez adjuk. 10,3 g (20 mmól) benzoil-D-allo-izoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-sót (4. példa, 1. lépés), és 0,23 ml (2 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 20 ml dimetilformamidban. Az oldatot -15 °C-ra hütjük, és keverés közben hozzáadunk 2,64 ml (20 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 5 perc után a fenti dimetilformamidos oldatot. A reakcióelegyet 1 órán át —15 °C-on és 1 órán át 0°C-on keverjük. Ezt követően a kivált sókat kiszűijük és kétszer 5 ml dimetilformamiddal mossuk. A dimetilformamidos oldatot 100 ml benzollal hígítjuk és a benzolos fázist háromszor 30 ml vízzel, kétszer 20 ml 1 n nátriumhidroxiddal, háromszor 30 ml vízzel, kétszer 20 ml 0,5 n kénsawal és háromszor 20 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 50 ml petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük, pet-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
