177070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BM.123 gamma antibiotikum, alkilezett származékainak előállítására
9 177070 10 Az NRRL 5646 letéti számú törzs szénforrás-hasznosítási adatai (a mikroorganizmust 10 napig 32 °C-on inkubáltuk) 4. táblázat Szénforrás Hasznosítás mértéke Adonit nem hasznosítja 1-Arabinóz nem hasznosítja Glicerin jól hasznosítja d-Fruktóz gyengén hasznosítja i-Inozit közepesen hasznosítja Laktóz nem hasznosítja d-Mannit nem hasznosítja Szalicin közepesen hasznosítja d-Melibióz nem hasznosítja d-Raffinóz nem hasznosítja Ramnóz nem hasznosítja Maltóz gyengén hasznosítja Szacharóz nem hasznosítja d-Trehalóz jól hasznosítja d-Xilóz nem hasznosítja Dextróz jól hasznosítja Negatív kontroll nem hasznosítja 5. táblázat Az NRRL 5646 letéti számú törzs kémiai összetételének jellemzői Sejtfal típusa Főkomponensek mezo-2,6-diamino-pimelinsav, IV arabinóz, galaktóz A BM123/3 és BM1237 antibiotikum előállításához nemcsak a fent ismertetett jellemzőkkel rendelkező mikroorganizmust, hanem e mikroorganizmus különböző mutagén kezelésmódokkal (például röntgen-besugárzással, ultraibolya besugárzással, nitrogénmustáros kezeléssel vagy aktinofágokkal végzett kezeléssel) kialakított mutánsait is felhasználhatjuk. Az NRRL 5646 letéti számú törzs egy mutánsának életképes tenyészetét a United States Department of Agriculture, Northern Utilization Research and Development Division (Peoria, Illinois) intézet törzsgyűjteményében NRRL 8050 számon helyeztük letétbe. Az NRRL 8050 letéti számú törzs tenyésztési, élettani és morfológiai jellemzői lényegében megegyeznek az NRRL 5646 letéti számú alaptörzsével, a mutáns törzs azonban aerob fermentáció esetén az alaptörzsnél nagyobb mennyiségű BM1237 antibiotikumot termel. Az NRRL 8050 letéti számú törzs az alábbi jellemzők tekintetében is különbözik az NRRL 5646 letéti számú alap törzstől: a) az alaptörzsnél lassabban redukálja a nitrátokat nitritekké, és b) Bennett-agaron és élesztőkivonat-agaron cserszínű micélium-pigmentet termel. A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként felhasználható BM1237] antibiotikum a (VII) képlettel, míg a BM12372 antibiotikum a (VIII) képlettel jellemezhető. A képletekből megállapítható, hogy e két antibiotikum egymás szerkezeti izomerje. A találmány szerinti eljárással kapott új termékek általában kristályos szilárd anyagok, amelyek nem-poláros oldószerekben, így dietiléterben és hexánban viszonylag rosszul, vízben és rövidszénláncú alkanolokban azonban viszonylag jól oldódnak. Ha a találmány szerinti reduktív alkilezésben Rs-CO-R6 általános képletű ketonokat használunk fel - ahol R5 és R6 jelentése a fenti -, akkor termékként (VI) általános képletű vegyületeket kapunk — ahol R, Rs és R6 jelentése a fenti. Amennyiben a BM1237, BM1237] vagy BM12372 antibiotikum reduktív alkilezéshez Rj-CHO általános képletű aldehideket - ahol Rj jelentése a fenti - használunk fel, termékként (la) vagy (II) általános képletű származékokat kapunk - ahol R és Rí jelentése a fenti. A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek antibakteriális hatását in vivo körülmények között, Escherichia coli US311 mikroorganizmussal megfertőzött egereken vizsgáltuk. Körülbelül 20 g testsúlyú „Carworth Farms CF-1” egereknek intraperitoneális úton, halált okozó dózisban adtuk be a kórokozót (a kórokozó 5 órás TSP-vér tenyészetét beadás előtt triptikáz-szója táptalajjal ezerszeresére hígítottuk). A vizsgálandó vegyületeket szubkután úton, egyetlen dózisban adtuk be. Az egerek 50%-ánál védőhatást biztosító dózisokat (ED5o mg/kg) a 6. táblázatban közöljük. A táblázatban ugyanakkor a vegyületek azonosítására megadjuk az elsődleges NMR-jelt is. 6. táblázat Karbonil-reagens Termék ED50 (5) mg/kg 1-Dipropil- l-Metil-2-(N,N-amino-2- -dipropil-amino)-propanon -etil-BM1237 0,3 0,9 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
