177070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BM.123 gamma antibiotikum, alkilezett származékainak előállítására
25 177070 26 zőképpen végezzük: Whatman No. 1 szűrőpapír-csflcra a vizsgálandó anyag vizes vagy metanolos oldatát cseppentjük, majd a szűrőpapír-csíkot 1—2 órán át a futtatószer alsó és felső fázisának gőzeivel tartjuk érintkezésben. A futtatást 5 100 : 25 :4 :4 :75 térfogatarányú fenol/m-krezol/ ecetsav/piridin/víz keverék alsó (szerves) fázisával végezzük. Egy éjszakán át tartó futtatás után a szűrőpapír-csíkot kiemeljük a kromatografáló kamrából, 1—2 órán át levegőn szárítjuk, a fenol 10 maradékainak eltávolítása érdekéoen éterrel mossuk, majd Klebsiella pneumoniae AD-törzzsel beoltott nagy agarlemezeken bioautográfíás vizsgálatnak vetjük alá. Az észlelt Rf-értékek a következők: 15 BM1237 Rf = 0,85 BM123/3 Rf = 0,50, 0,70 A BM123/3 antibiotikum tehát két komponens 20 keveréke, a főkomponensként jelenlevő BM123/3i antibiotikum Rf-értéke 0,50, míg a kisebb mennyiségben jelenlevő BM123/32 antibiotikum Rf-értéke 0,70. A BM123-antibiotikumok vékonyrétegkroma- 25 tográfíás úton is megkülönböztethetők és elkülöníthetők egymástól. A vékonyrétegkromatográfiás elemzést a következőképpen végezzük: 0,10 mm vastag bevonatot hordozó Cellulose F lemezekre (az EM Laboratories, Inc., Elmsford, New York 30 cég gyártmánya) a vizsgálandó anyag vizes oldatát cseppentjük (egy-egy csepp oldat körülbelül 20-40ßg vizsgálandó anyagot tartalmaz), majd a lemezeket éjszakán át 15:12:10:1 térfogatarányú 1-butanol/víz/piridin/ecetsav eleggyel kezel- 35 jük. Ezután a lemezeket kiemeljük a kromatografáló kamrából, és körülbelül 1 órán át levegőn szárítjuk. Az antibiotikumokat ninhidrinnel vagy Sakaguchi-reagenssel hívjuk elő. Az észlelt Rf-értékek a következők: 40 BM123y antibiotikum eltűnését kíséqük figyelemmel. Ezután a reakcióelegyet szüljük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 3 ml metanollal eldörzsöljük, szüljük, és a szűrletet 50 ml acetonnal hígítjuk. A kivált csapadékot leszűijük és szárítjuk. Amennyiben reagensként vízben oldódó aldehidet vagy ketont használunk fel, oldószerként metanol helyett 20 ml vizet is felhasználhatunk. 9. példa Metil-BM123y előállítása 1,0 g BM123y, 2,5 ml 37%-os vizes formaldehid-oldat és 50 ml víz elegyébe részletekben 400 mg nátrium-cianobórhidridet adagolunk. Az adagolás alatt a reakcióelegy pH-ját 1 n vizes sósavoldat időnkénti beadagolásával 7,0 körüli értéken tartjuk. A reakcióelegyet további 10 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 20 ml metanollal eldörzsöljük, szűqük, és a szűrletet 250 ml acetonnal hígítjuk. A kivált terméket leszűijük és szárítjuk. 667 mg terméket kapunk. 10. példa Izopropil-BMl 23y előállítása 200 mg BM123y 30 ml metanollal készített oldatához 5 ml acetont, majd 139 mg nátrium-cianobórhidridet adunk, és a kapott elegyet 30 percig szobahőmérsékleten keveijük. Ezalatt az elegy pH-ját 0,1 n metanolos sósavoldat beadagolásával 7,4 és 7,8 közötti értéken tartjuk. A kivált csekély mennyiségű csapadékot kiszűijük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 2 ml metanollal eldörzsöljük, szűrjük, és a szűrletet 100 ml acetonnal hígítjuk. A kivált szilárd anyagot leszűijük és szárítjuk. 184 mg terméket kapunk. BM123y Rf = 0,17, 0,23 BM123/3 Rf = 0,08, 0,14 45 Az adatokból megállapítható, hogy a vizsgált minta két BM123/3 antibiotikum-komponenst és két BM123y antibiotikum komponenst tartalmaz. A BM12301 antibiotikum Rf értéke 0,08, a BM123y2 antibiotikum Rf-értéke 0,14, a BM1237f antibioti- 50 kum Rf-értéke 0,23, a BM123y2 antibiotikum Rf-értéke pedig 0,17. BM123y antibiotikum reduktív alkilezése (általános eljárásmód) 11. példa |3-Fenil-etil-BM1237 előállítása 200 mg BM123y 15 ml vízzel és 25 ml acetonitrillel készített oldatához 2 ml fenilacetaldehid 4 ml etanollal készített oldatát adjuk. A reakcióelegyhez 103 g nátrium-cianobórhidridet adunk, és az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten keveijük. Ezalatt az elegy pH-ját 0,2 n vizes sósavoldat beadagolásával 7 körüli értéken tartjuk. A reakcióelegyet szüljük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 2 ml metanollal eldörzsöljük, szűqük, és a szűrletet 100 ml acetonnal hígítjuk. A kivált terméket leszűijük és szárítjuk. 180 mg terméket kapunk. 100 mg BM123y antibiotikum 20 ml metanollal készített oldatához 5 ml vagy 5 g aldehidet vagy 60 ketont és 100 mg nátrium-cianobórhidridet adunk. A kapott oldat pH-ját a reakcióidő (3-24 óra) alatt 0,1 n metanolos sósavoldat beadagolásával körülbelül 7,0 értéken tartjuk. A reakció előrehaladását vékonyrétegkromatográfiás úton követjük, a 65 12. példa 1,3,3-Trimetil-butil-BM1237 előállítása 200 mg BM1237-hidroklorid 50 ml metanollal készített oldatához 3 ml 4,4-dimetil-2-pentanont és 106 mg nátrium-cianobórhidridet. adunk. Az elegyet 13
