176828. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrogént tartalmazó tumorgátló poliszacharidok előállítására
5 176828 6 A találmány szerinti eljárással előállított nitrogéntartalmú poliszacharidok egereken intraperitoneális és orális adagolás esetén egyaránt igen jó tumorgátló hatást fejtenek ki, ennek megfelelően a kapott termék a gyógyászatban igen kedvezűen használható fel orálisan adagolható daganatellenes hatóanyagként. A találmány szerint előállított termék további kedvező hatása, hogy ellensúlyozza a gazdaszervezet csökkent immunitását. Ennek megfelelően a találmány szerint előállított terméket nemcsak a rák kemoterápiás kezelésére, az ennek során fellépő kedvezőtlen mellékhatások visszaszorítására és a sugárterápiás kezelés hatékonyabbá tételére használhatjuk fel, hanem a beteg fizikai erőnlétének vagy immunitásának fokozására is. Miként ismert, sebészeti beavatkozások vagy vértranszfúziók esetén jelentős mértékben csökken a betegek fizikai erőnléte és immunitása, így a betegek baktérium- vagy vírusfertőzésekkel szemben fogékonyabbá válnak. A találmány szerinti eljárással előállított termék adagolásával ezt a kedvezőtlen hatást ellensúlyozhatjuk. A találmány szerinti eljárással előállított termék orális adagolás esetén igen nagy mértékben javítja a májfunkciót, fokozza a beteg étvágyát, gyógyítja a bélrendszeri rendellenességeket és fokozza a vizeletkiválasztást. A találmány szerinti eljárással kapott termék a lepra kezelésére is alkalmas. A találmány szerinti eljárási az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 200 g Coriolus versicolor (Fr.) Quél. (FERM—P No. 2414) száraz micéliumot (nedvesség-tartalom: 9,9%), melyet mesterséges tenyészetből nyertünk ki és 2 liter vizet 5 literes, ke verő vei ellátott lombikba mérünk, az elegyet forró vízfürdőn keverjük, és ilyen körülmények között 95+2 °C belső hőmérsékleten tartjuk 3 órán keresztül. Az elegyet lehűtjük és szívatással szűrjük Buchner tölcsért használva, hogy elkülönítsük a gombát és az extraktumot, majd a visszamaradó micéliumokat körülbelül 1 liter vízzel mossuk és elkeverjük az extraktumot tartalmazó oldattal. Az így kapott elegy térfogata körülbelül 3,5 liter. Az extraktum pH-értéke 5,8. A visszamaradó micéliumokat elkeverjük 2 liter vízzel, majd az előzőhöz hasonló 2 órás extrakciónak vetjük alá, és végül 1 liter vízzel mossuk, amikor 3 liter extraktumot kapunk. A kapott gomba maradékot ismét elkeverjük 2 liter 0,1 n nátrium-hidroxid oldattal és hasonlóan extraháljuk 2 órán keresztül 95+2 °C-on. Az extrahálást szűrés, 2 n sósav-oldattal végzett semlegesítés és szívatás mellett végzett szűrés követi, amelynek célja az extraktum és a gomba maradék elkülönítése. Elkülönítés után a maradékot körülbelül 500 ml vízzel mossuk, és elkeverjük az extraktummal, amikor 2,5 liter oldatot kapunk. Hasonló műveletek megismétlésével további extrahálást végzünk 2—2 liter 0,2 n, 0,3 n, 0,4 n nátriumhidroxid-oldatok segítségével, amit 0,5 liter vízzel végzett mosás követ. így 2,5 liter extraktumot kapunk minden egyes eljárási lépésből. A hat lépésből származó oldatokat, melyeknek össztérfogata 16,5 liter, egyesítjük, és vákuum forgóbepárlóval 60 °C-on 700 ml térfogatra koncentráljuk, majd dialízises cellulóz csőbe töltjük (Visking Tube by Union Carbide Corp.), ahol 5 °C-on 72 órán át folyamatos dialízist hajtunk végre. A kapott dializátumot tovább koncentráljuk és liofilizáljuk, amikor 60 g máj-barna port kapunk, melynek nedvesség-tartalma 7%. Kitermelés: 31,1%. A kapott termék analízise a következő eredményre vezetett: C=-40,3%, FI 6.2N = 2,9%, 0 = 50,6",,. A termék molekulasúlyának oszlopkromatográfiás meghatározása szerint azt kaptuk, hogy a molekulasúly megközelítőleg 10 000—250 000, és az átlagos molekulasúly, vizes oldószer felhasználásával végrehajtott ultracentrifugálás alapján, 94 000. A fenti analíziseredmények között megadott oxigéntartalmat úgy kaptuk, hogy a többi elem mennyiségét összeadtuk és az így kapott értéket kivontuk 100-ból. Az így kapott port vízben feloldva és végrehajtva a különböző szín-reakciókat az 1. táblázatban megadott eredményeket kapjuk, ami azt igazolja, hogy a porszerű anyag nitrogén-tartalmú poliszacharid. Az előállított anyag Sarcoma—180-al szemben mutatott gátló aránya egereken 90%, intraperitoneális adagolás és 70% orális adagolás esetén. A vegyület daganat-ellenes hatását a következőkben ismertetendő ismert módszerrel vizsgáltuk. Sarcoma—180 daganatsejteket ültettünk át egerek hasüregébe és 7—8 nap elteltével, amikor a sejtek már kellőképpen megnőttek, 106 darabot ezekből a sejtekből átültettünk más egerek hónaljának bőre alá, hogy szilárd daganatokat hozzunk létre. A találmány szerinti eljárással előállított anyag adagolását 24 órával az átültetés után kezdtük meg. Intraperitoneális adagolás esetén az anyagot 10 mg/kg dózisban napi egyszeri alkalommal, 20 napon át adagoltuk 0,2 ml/20 g (egér testsúly) teljes dózisig, és orális adagolásra az anyagokat 1000 mg/kg adagban napi egyszeri alkalommal 20 napon át adagoltuk, 0,2 ml/20 g (egér testsúly) teljes dózisig. A daganatokat kifejtettük az átültetést követő 25. napon, és meghatároztuk a daganatnövekedés-gátló arányt (%) megmérve az átlagos daganatsúlyt azokban az egerekben, amelyeket a találmány szerinti eljárással előállított anyaggal kezeltünk, illetve a kontroll állatokban. Azok az eredmények, amelyeket akkor kaptunk, amikor hasonló extrakciós kísérleteket folytattunk oldószerként csak vizet használva, a 2. táblázatban láthatók. Ezekben a kísérletekben valamennyi extrahálási és mosási lépést ugyanannyi vízzel hajtottuk végre, mint amennyi oldószert a korábban leírt kezelés során használtunk. Ebben az esetben a mosóvízzel kevert extraktumot vákuumbepárlással, dialízissel, hűtéssel és szárítással dolgoztuk fel. Az ezek után az egyes extrahálási lépésekben meghatározott kitermeléseket szintén a 2. táblázatban adjuk meg. Amint a táblázatból látható az extrakciós kitermelés élesen csökken a második és azt követő extrahálási lépésekben, és alig lehetséges a kívánt anyag jó hozammal történő előállítása az extrakció többszörös megismétlése útján. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
