176828. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrogént tartalmazó tumorgátló poliszacharidok előállítására
7 176828 8 2. táblázat Az extrakciós lépés száma [ Extrakciós oldat (liter) Mosóoldat (liter) Kitermelés a száraz porra számítva (súly%) í. ■ 3 í 7,0 2. 2 0,5 2,1 3. ' 2 0,5 0,8 4. I 2 0,5 0,3 5. ! 2 0,5 0,1 6. ' 2 0,5 0,1 Teljes 1 13 ! 3,5 10,4 Megjegyzés: A kiindulási anyagként használt micélium súlya 200 g. Az extrahálás hőmérséklete: 95 ±2 °C. 2. példa Az 1. példában leírt berendezést használva 200 g Coriolus versicolor (Fr.) Quél. (FERM—P No. 2414) száraz micéliumot 2 liter 0,05 n, 0,1 n, 0,2 n és 0,4 n nátriumhidroxid-oldattal extrahálunk egymást követő lépésekben. Az extrakció hőmérséklete 90—95 °C és ideje 2 óra minden egyes lépésben. Az egyes példák után lehűtjük az extrakciós elegyet, semlegesítjük 2 n sósavoldattal és szívatással szűrjük, hogy a gomba maradékot és az extraktumot elválasszuk egymástól. A maradékot minden egyes extrakciós lépés után 500 ml vízzel mossuk, és a mosó-oldatokat elkeverjük a megfelelő extraktummal. Az egyes lépésekben kapott extraktumokat vákuumban koncentráljuk, dialízisnek vetjük alá, koncentráljuk és liofilizáljuk az 1. példában leírt módon, és így májbarna port kapunk. Az egymást követő extrakciós műveletekben kapott termékkel végzett kísérletek eredményeit a következő 3. táblázatban adjuk meg. 3. táblázat Az extrakciós lépés száma Nátriumhidroxid koncentráció pH az extrahálás alatt Kitermelés a száraz porra számítva (%) í. 0,05 n 9,0 10,1 2. 0,1 n 11,5 3,5 3. 0,2 n 12,5 6,8 4. 0,4 n 13,0 6,6 A teljes kitermelés, amint a táblázatból látható, 27%, és a kapott termék analízise a következő eredményeket szolgáltatta : C=41,0%, H = 6,3%, 0=49,0%, N=3,7%. Az 1. példában ismertetett vizsgálatok azt igazolták, hogy a fenti por egy nitrogén-tartalmú poliszacharid, amelynek molekulasúlya 10 000—250 000, átlagos molekulasúlya 100 000. A Sarcoma—180 tömör daganattal szemben mutatott gátló hatás egereken 93%, intraperitoneális adagolás esetén is 73%, ha az adagolás orálisan történt. Az extrakciós kitermelés összehasonlítása céljából az 1. példában leírt kísérleteket 1 a és 0,4n nátriumhidroxidoldatokkal is végrehajtottuk, amikor a 4. táblázatban feltüntetett eredményeket kaptuk. Amint a táblázatból látható, a kitermelések csökkentek, mivel az extrakciós műveleteket azonos koncentrációjú extraháló oldatokkal végeztük, és igen nehéznek bizonyult a találmány szerinti többlépcsős extrakciós eljárással kapottakhoz hasonló, magas hozamok elérése. 4. táblázat Az extrakciós lépések száma A végtermék kitermelése az extrakciót 1 n nátriumhidroxidoldattal végezve (súly%) A végtermék kitermelése, az extrakciót 0,4 n nátriumhidroxid-oldattal végezve (súly %) í. 10,5 13,8 2. 2,4 2,9 3. 1,1 2,0 4. 0,5 1,5 Teljes kitermelés 14,5 20,2 3. példa Az 1. példában leírt berendezést használva, 200 g Coriolus versicolor (Fr.) Quél. (FERM—P No. 2414) száraz micéliumot (nedvesség-tartalom: 9,9%) először 3 liter vízzel extrahálunk 95 + 2 °C hőmérsékleten, 3 órán keresztül, majd az elegyet lehűtés után szívatással szűrjük, hogy elválasszuk a maradék micéliumokat és az extraktumokat tovább mossuk 1 liter vízzel, majd a mosófolyadékot elkeverjük az extraktummal, és így körülbelül 3,5 liter oldatot kapunk. Ezután a visszamaradó micéliumokat 2 liter 1 n nátriumhidroxid-oldattal 90—95 °C-on 0,5 órán át extraháljuk, majd az elegyet hűtjük, 2 n sósav-oldattal semlegesítjük, szívatással szűrjük és 1 liter vízzel mossuk, ezzel elválasztva a 3 liter extraktumot és a gomba maradékot. Az így kapott extraktumot egyesítjük, vákuumban koncentráljuk, dializáljuk tovább koncentráljuk és liofilizáljuk ugyanúgy, ahogy az 1. példában leírtuk, és így 33 g máj-barna port kapunk, melynek nedvességtartalma 0,7%, ami 21,0% kitermelésnek felel meg. A por analízise alapján a következő eredményt kaptuk: C=41,7%, H=6,4%, N=3,9%, 0=48,0%. Az 1. példában leírt vizsgálatokkal itt is megállapítottuk, hogy a tennék egy nitrogén-tartalmú poliszacharid, melynek molekulasúlya 10 000—300 000 és átlagos molekulasúlya 98 000. A kapott anyag Sarcoma—180-al szemben mutatott gátló hatása egereken intraperitoneális adagolás esetén 94% és orális adagolásnál 68% volt. 4. példa Az 1. példában ismertetett berendezést használva 200 g száraz Coriolus versicolor (Fr.) Quél. (FERM—P No. 2414) termőtestet, melynek nedvesség-tartalma 8,7%, először 2,4 liter vízzel extrahálunk 95 ±2 °C-on 3 órán keresztül, majd a terméket, lehűtés után szívatással szűrjük, hogy elválasszuk a maradékot és az oldatrészt. A maradékot tovább mossuk 500 ml vízzel és elkeverjük az extraktummal, amikor 2,5 liter oldatot kapunk. A maradékot ezután elkeverjük 2 liter 0,4 n nátriumhidroxid-oldattal és 90 ± 2 °C-on 1 órán át extraháljuk, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
