176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
19 176623 20 metanolban és 150 ml vízben. Az oldathoz aktívszenet adunk, majd 1 óra hosszat keverjük és palládiumszén katalizátor jelenlétében 10 óra hosszat hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük és az oldatot vákuumban 100 ml-re bepároljuk. Ehhez 200 ml dioxánt és hűtés közben 21 ml trietilamint és 80 g BOC-Thr(Bzl)-OSU-t adunk. Miután 3 napig szobahőmérsékleten kevertük, N,N-dimetilamino-l,3-propándiamint adunk hozzá, 3 óra hosszat keverjük, majd 100 ml-re bepároljuk és etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos réteget n sósavval és vízzel mossuk és vákuumban desztilláljuk. A kapott olajos terméket éterben feloldjuk, és 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. A vizes réteget éterrel mossuk, ismét etilacetáttal extraháljuk, majd vízzel, n sósavval és vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és az etilacetátot elpárologtatva 57 g olajos terméket kapunk. (CH2)5COOH I 27. BOC-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)-HNCHCOOCH3. CHA (CH2)5COOH I 50 g BOC-Thr(Bz!)-HNCHCOOCH3-t feloldunk 150 ml trifluorecetsavban, miközben az oldatot hűtjük. Ezután 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a trifluorecetsavat csökkentett nyomáson eltávolítjuk és az olajos maradékot nátriumhidroxidon vákuumban éjszakán át szárítjuk. Az olajos anyagot dimetilformamidban feloldjuk és az oldat pH-értékét hűtés közben 40 ml trietilaminnal 6-ra állítjuk. Ezután 5 g 1-hidroxibenztriazolt és 50 g BOC-Ser(Bzl)-OSU-t adunk hozzá. A reakciókeverék pH-értékét N-metilmorfolinnal 6-ra állítjuk és 3 napig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután N,N-dimetilamino-l,3-propándiamint adunk hozzá és a reakciókeveréket 1 óra hosszat keverjük, vizet adunk hozzá és etilacetáttal extraháljuk. A kivonatot n sósavval, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, és vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. Az etilacetátot elpárologtatjuk és a maradékot 300 ml etiléterben feloldjuk, majd 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal ismét extraháljuk. A vizes réteget sósavval megsavanyítjuk, etilacetáttal extraháljuk és az etilacetátos réteget 5%-os nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. Ezután az etilacetátos réteghez egyenértéknyi mennyiségű ciklohexilamint adunk, a reakciókeveréket csökkentett nyomáson desztilláljuk, és az olajos terméket éter és n-hexán hozzáadásával megszilárdítjuk. Kitermelés 41 g. Olvadáspontja 70—73°. [zJd = +4,9 ' (c=2,7, dimetilformamidban). 28. BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-NHNH2 15 g (27,2 mmól) BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-OEt-t feloldunk 100 ml metanolban, és ehhez az oldathoz 50 ml 80%-os hidrazinhidrátot adunk és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Etiléter hozzáadásával a kivált csapadékot teljesen leválasztjuk, és a csapadékot etiléterrel mossuk, majd MeOH-AcOEt-etiléter elegyből átkristályosítva 13,5 g (92,5%) terméket kapunk. Olvadáspontja bomlás közben 207—209°. [«Id = — 17,4° (c=0,77, dimetilformamidban). 29. BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)(CH2)5COOH-HNCHCOOH (CH2)5COOH I 10,0 g BOC-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)-HNCH-COOCH3. .CHA-hoz etilacetátos n sósavat adva a szabad savat felszabadítjuk, majd vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékhoz hűtés közben 30 ml trifluorecetsavat adunk, és 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd a trifluorecetsavat csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. 8,5 g BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-NHNH2-t feloldunk 30 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk n sósavat és 3,1 ml izoamilnitritet tartalmazó 14 ml dioxánt és 20 percig reagáltatva kapjuk azazidot. A fent kapott, szárított trifluorecetsav-sót feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal semlegesítjük, majd —40° alatt hozzáadjuk az azid-vegyületet tartalmazó oldathoz. A reakciókeverék pH-értékét triatilaminnal 7-re állítjuk, és 3 napig 5°-on tartjuk. Ezután a reakciókeveréket —5°-on lassan hozzáadjuk 300 ml 0,5 n sósavhoz. A kivált csapadékot kiszűrjük és vízzel mossuk, majd 500 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos réteget n sósavval és nátriumklorid-oldattal mossuk és a kloroformot csökkentett nyomáson eltávolítjuk, majd a maradékhoz kloroform-n-hexán elegyet adva a terméket leválasztjuk. Kitermelés 11,8 g (84,3%). Olvadáspontja bomlás közben 183—185°. [a]“ 5,5° (c=0,72, dimetilformamidban). Aminosav-összetétel: Asp 1,00 (1), Thr 0,82 (1), Ser 1,62 (2), Leu 0,91 (1), a-amino-szuberinsav 1,05 (1). I-------------------(CH2)5----------------------------J 30. -CO-Ser(Bzl>Asn-Leu-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)-HNCH-CONHNH2 3,2 g (3 mmól) BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-Ser(Bzl)-Thr(CH^COOH ! (Bzl)-HNCHCOCH3-t feloldunk 30 ml vízmentes piridinben, hozzáadunk 5 g tri-fluorecetsav-p-nitrofenilésztert és 3 óra hosszat 45°-on keverjük. Ezután a reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, és etilétert adunk hozzá. A csapadékot etiléterrel mossuk, majd szárítva 2,9 g sárgásbarna port kapunk. Ehhez hűtés közben 20 ml trifluorecetsavat adunk és 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd a trifluorecetsavat elpárologtatjuk, és a maradékot 20 ml dimetilformamidban feloldjuk. Az oldatot 45°-on hozzácsepegtetjük 2,5 liter vízmentes piridinhez és 30 percig keverjük, majd 7 óra hosszat 50°-on és éjszakán át szobahőmérsékleten tovább keverjük. Ezután a reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, 2 liter kloroformban feloldjuk és telített vizes nátriumklorid-oldattal, n sósavval és 5 ízben vizes nátriumklorid-oldattal mossuk és végül a kloroformos réteget vákuumban 10 ml-re bepároljuk. A bepárolt oldathoz 500 ml n-hexánt adunk és a kivált csapadékot kiszűrve 2,0 g (72%) terméket kapunk. Olvadáspontja bomlás közben 165°. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
