176462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolin-származékok előállítására fermentációs úton
5 176462 6 mot először vizes sav-oldatokkal, előnyösen foszforsav-oldattal beállítjuk pH = 2-3-ra, és ekkor tisztíthatjuk szénhidrogén-keverékekkel, például petroléterrel vagy petroléter-xilol-eleggyel, az elvált vizes fázis pH-ját ammóniumhidroxid-oldattal beállítjuk pH = 8-9-re, majd karbonsav-(rövidszéniáncú alkil)észterekkel, előnyösen etilacetáttal extraháljuk és a kapott extraktumot vízzel mossuk. Azt találtuk továbbá, hogy meglepő és elegáns módon úgy is eljárhatunk, hogy az anyarozsalkaloidákat az ammóniumhidroxid-oldattal meglúgosított, az új Claviceps purpurea-t tartalmazó tenyésztési folyadékból, a biomassza előzetes elválasztása nélkül, ammóniumszulfát hozzáadásával közvetlenül extrahálhatjuk karbonsav-(rövidszénláncú alkil)-észterekkel, előnyösen etilacetáttal, majd eltávolíthatjuk a zavaró kísérőanyagokat oly módon, hogy híg vizes savakkal, előnyösen foszforsav-oldatokkal folyadék-folyadék-extrakciót végzünk, majd a kapott vizes extraktumot pH = 8-9- nél karbonsav-(rövidszénláncú alkii)-észterekkei, előnyösen etilacetáttal, folyadék-folyadék-extrakciónak vetjük alá. Az előzőek szerint tisztított alkaloid-extraktumot +30 °C-t meg nem haladó hőmérsékleten bepárolhatjuk, és a kapott koncentrátumokból megkezdjük az alkaloidák differenciált végső tisztítását. Azt találtuk továbbá, hogy a tiszta alkaloidák kinyerése szempontjából, összehasonlítva a 41 967 számú Német Demokratikus Köztársaság-beli szabadalmi leírással előnyösebb, ha a fentiek szerint kapott nyers alkaloid-koncentrátumokat 1—3 térfogatrész kloroformban oldjuk, az oldatokat +10 C-t meg nem haladó hőmérsékleten tároljuk, a meglepő módon csaknem kvantitatíve kikristályosodó pigmentszegény ergometrin-kloroform-adduktot leszűrjük és átalakítjuk nagy tisztaságú savaddiciós sóvá, előnyösen hidrogénmaleináttá. Az ergometrin leszűrése után kapott szűrletet ezután +30 °C-t meg nem haladó hőmérsékleten zavarmentesen koncentrálhatjuk, előnyösen oly módon, hogy előbb adszorbeáltatjuk, majd deszorbeáltatjuk vagy az ún. Batch-eljárás segítségével, vagy alumíniumoxidon végzett oszlopkromatográfia útján, aholis az alkaloid-koncentrátumban levő ossz ;-alkaloidmennyiségre számított arány előnyösen 1 :20 vagy 1 :5, és egyúttal aktív-szén hozzáadásával (adszorbeálószerek aránya: alumíniumoxid : aktív-szén = 5:1), és eluálószerként karbonsav-alkilésztereket, előnyösen etilacetátot alkalmazunk, vagy klórozott szénhidrogéneket, előnyösen kloroformot, vagy az előbbi oldószerek egymással képezett vagy aromás szénhidrogénekkel, előnyösen benzollal képezett két-komponensű oldószer-elegyeket alkalmazunk. Az extraktumokat vagy eluátumokat ezután +30 °C-t meg nem haladó hőmérsékleten bepároljuk, a kapott ergotoxin-ergotoxinin-keverékeket aromás szénhidrogénekkel, példáid benzollal, toluollal vagy xilollal végzett kristályosítással szétválasztjuk, és a kapott epimer-mentes nagytisztaságú kristályos ergotoxin-aromás vegyület-adduktot adott esetben átalakítjuk az ergotoxin savaddíciós sójává, előnyösen etánszulfonátjává. Továbbá azt talaauk, hogy a fenti módon kapott ergotoxin kevés aktív Raney-nikkel jelenlétében +50—80 °C, előnyösen +60 °C hőmérsékleten és 30-70 atm, előnyösen 50 atm nyomáson dioxánban, vagy légnyomáson +20-30 C, előnyösen +25 °C hőmérsékleten, 5-10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében, vizes dioxinban hidrogénezzük rotációs berendezésben, és így jutunk a pigment-mentes 9,10-dihidroergotoxinhoz. A hidrogénezett bázisokat önmagában ismert módon átalakítjuk savaddíciós sóikká. Az új, tenyésztés útján kapott törzset, amelynek jellemzői eddig ismeretlenek, és amely alkalmas technikai és gazdasági szempontból előnyös ipari anyarozsalkaloida-termelésre, különösen az ergotoxin-csoportba tartozó alkaloidák és ergometrin termelésére, a Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie Jena der Deutschen Akademie der Wissenschaften zu Berlin nevű intézetben deponáltuk, és a deponálási száma IMET PA 130. Az új törzset egy kísérleti parcellából származó szkleróciumból végzett tenyésztésből izoláltuk, és mutagén kezelésnek vetettük alá. Az új törzs az I. táblázatban összefoglalt morfológiai tulajdonságokkal rendelkezik. I. Táblázat A Claviceps purpurea (Fr.) Túl. (IMET PA 130) törzs morfológiai tulajdonságai, különböző agar-táptalajokon, 14 napos, Petri-csészékben 24 °C-on végzett tenyésztés után 1. Táptalaj (3% szacharóz, 0,3% náiriumnitrát, 0,1% káliumhidrogénfoszfát, 0,05% magnéziumszulfát-heptahidrát, 0,001 % vas(II)-szulfát-heptahidrát, 1% kukoricát duzzasztó viz, 3% agar, pH = 6,8-6,9) A képződött kolónia alakja: Domború, kompakt, szabálytalan és erősen haj togatott kolónia, az alsó része sima, nem emelkedik el a laptól. A kolónia átmérője: 1,0—1,5 cm. A kolónia színe: felső része világos barna - ibolya színű, a széle fehér, az alsó része barna és az alsórész széle világosbarna. Átlagos spórásodás: 46,3 x 106 konídium/kolónia. 2. Táptalaj (15% sörcefre, 0,5% élesztő extraktum, 0,5% ammóniumfoszfát, 0,1% ammóniumcitrát, 3% agar, pH = 6,0) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
