176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására
57 176260 58 90. példa H—Me—Tyr-D—Ser-Gly—Phe(6H)-Leu—OMe-t (102. sz. kiindulási anyag) vizes oldatban 2 mólekvivalens nátriumhidroxiddal kezelünk, majd az ele- 5 gyet a 89. példában közöltek szerint feldolgozzuk. Termékként H—Me—Tyr-D-Ser-Gly-Phe(6H)— -Leu-OH-t kapunk, Rf: 0,44 (C. rendszer). 91. példa 140 mg (224/amól) Ac-Tyr—D-Ala-Gly-Phe— 15 —Leu—OMe-t (123. sz. kiindulási anyag) 10 ml meleg dioxánban oldunk, és az oldatot szobahőmérsékletre hagyjuk hűlni. Az elegyhez 2 ml vizet és 0,75 ml (3,5 ekvivalens) 1 n vizes nátriumhidr-oxid-oldatot adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 20 2,5 órán át erélyesen keverjük, majd a dioxán főtömegét vákuumban lepároljuk. A maradékot 1 n vizes sósavoldattal megsavanyítjuk, és a kapott szuszpenziót vákuumban betöményítjük. A maradékhoz vizes ammóniát és 0,05 mólos vizes am- 25 móniumacetát-oldatot adunk. A kapott átlátszó oldatból elpárologtatjuk az ammónia fölöslegét, majd az oldatot SephadexG25 géllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Oldószerként 0,05 mólos vizes ammóniumacetát-oldatot használunk. A kívánt ter- 30 méket tartalmazó frakciókat fagyasztva szárítjuk. Termékként Ac—Tyr—D—Ala—Gly—Phe—Leu—OH-t kapunk, Rf : 0,56 és 0,47 (D. rendszer). 92. példa 100 mg (157/rmól) H—Me—Tyr—D—Ala-Gly— -Phe-Leu-OMe • HC1 (az 1. példa szerint kapott 40 termék) 15 ml metanollal készített oldatát 4 °C-ra hűtjük és vízmentes ammóniával telítjük. Az elegyet 2 napig 4°C-on tartjuk, majd az Oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként Q. rend- 45 szert, majd K. rendszert használunk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, és a maradékot fagyasztva szárítjuk. Termékként H-Me— -Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-NH2-t kapunk, Rf: 0,22 és 0,70 (H. és K. rendszer). 50 93. példa 55 100 mg H—Tyr-D—Ala—Gly—Phe—OMe 1 ml dimetilformamiddal készített oldatához 50 mólekvivalens etilamint adunk, és az elegyet 3 napon át 4 °C-on keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot szilikagél-oszlopon kromatogra- gg fáljuk. Eluálószerként K. rendszert használunk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, és a maradékot fagyasztva szárítjuk. Termékként H—Tyr—D-Ala-Gly-Phe—Leu—NHEt-t kapunk, Rf: 0,62, 0,50 és 0,90 (D., H., illetve K. rendszer). <s Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az (I) általános képletű enkefalin-analóg polipeptidek és gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós vagy bázis-addíciós sóik előállítására — ahol a képletben (Í)r R jelentése hidrogénatom vagy metil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom vagy acetil-csoport, vagy Glu, Asp, /3-Ala, D-Lys, az e-helyzetű amino-csoporton adott esetben terc-butoxikarbonil-csoporttal szubsztituált Lys, H—Glu—Gly—OH H-Lys-, H-Phe H-Lys-, H-Gly-Gly-Gly H-Lys-, H-Ásp H-Lys-, H-Lys H-Lys-, H-Gly-Gly-, H-Leu-Leu—Leu-, H-Arg-Pro-Lys-, H-Pro-Gln-Gln-, H-Gly-Gly-Gly-, H-Lys-Gly-Gly-Gly-, H-Asp-Gly-Gly-GÍy-, H-Arg-Pro-Lys-Pro—Gin—Gin- vagy H-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly—Gly-csoport, B jelentése D—Ala, ß-Ala vagy Azala csoport, E jelentése GÍy vagy Azgly csoport, F jelentése Phe, hexahidroPhe vagy Azphe csoport, G jelentése DL-Leu, Leu, D-Leu, Azleu, Nie, Met, Pro vagy Azpro csoport, és K jelentése hidroxil-csoport, amino-csoport, fenoxi-csoport, 1—6 szénatomos alkoxi-csoport, 2-4 szénatomos alkeniloxi-csoport, egy hidroxil-, amino-, Í—4 szénatomos alkilamino-, N-(l -4 szénatomos)-alkil-N-benziloxikarbonilamino- vagy 1—20 szénatomos alkanoiloxi-szubsztituenst vagy két 1—20 szénatomos alkanoÜ- oxi-szubsztituenst hordozó 1-4 szénatomos alkoxi-csoport, 1—4 szénatomos alkilamino-csoport, 5—7 szénatomos cikloalkil amin o-csoport, di-(1-4 szénatomos)-alkil-amino-csoport, hidroxil-, 1—4 szénatomos alkilamino- vagy di-(l —4 szénatomos)-alkil-amino-szubsztituenst hordozó 1-4 szénatomos alkilamino-csoport, morfolino-csoport, tetrahidropirrolo-csoport vagy 1-4 szénatomos alkil-csoport, vagy G és K együtt valamely D-, L- vagy DL-konfigurációjú (III) vagy (IV) képletű csoportot vagy egy (II) képletű csoportot alkot, azzál a feltétellel, hogy B, E, F és G közül legalább az egyik aza-aminosav-maradéktól eltérő csoportot jelent, vagy R1 és R2 egyaránt hidrogénatomot jelent, K 1-6 szénatomos alkoxi-csoportot jelent, G Leu, D-Leu, Azleu vagy Nie csoportot jelent, E jelentése Gly vagy Azgly csoport, F jelentése Phe, hexahidroPhe vagy Azphe csoport, és B D—Asp, D-Thr, D-Trp, D-Leu, D-Lys vagy D-Met csoportot jelent, azzal a feltétellel, hogy E, F és G közül legalább az egyik aza-aminosav-maradéktól eltérő csoportot jelent, vagy 29
