176104. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás (+) 13ß-alkil-3-metoxi-17-oxo-gonaének mikrobiológiai előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 176104 Bejelentés napja : 1978. VI. 9. (GO—1409) Nemzetközi osztályozás: C 07 J 13/00 Közzététel napja: 1980. VI. 28. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI Megjelent: 1981. VII. 31. 1 * r. ' >• • ] HIVATAL . i ,. : Feltalálók : Szabadalmas : dr. Toldy Lajos oki. vegyész, Gyógyszerkutató Intézet, Budapest dr. Szentirmai Attila mikrobiológus, Makk Nándor oki. vegyész, Budapest Üj eljárás (+)13B-alkiI-3-metoxi-17-oxo-gonaének mikrobiológiai előállítására 1 2 A találmány tárgya új eljárás (+) 13ß-alkil-3-metoxi-17-oxo-gonaének előállítására I általános képletű racém gonaének — ahol R jelentése etil- vagy metilcsoport, Z jelentése pedig II, III vagy IV képletű csoport — sztereoszelektiv mikrobiológiai oxidációjával. A találmány szerinti mikrobiológiai eljárással előállított vegyületek az optikailag aktív norszteroidok totálszintézisének fontos intermedierjei. Az optikai antipódok racém elegyből történő szétválasztására szolgáló módszerek két csoportba sorolhatók. Az egyik a kémiai út, amikor optikailag aktiv vegyülettel előállítható származék ad lehetőséget a két antipód szelektív elkülönítésre. A másik módszer szerint enzimreakciót használnak a feladat megoldására. Ez esetben az enzim a racemát egyik antipódjának ké- 15 miai átalakulását katalizálja; az így átalakított termék és az át nem alakult vegyület viszont már könnyen szétválasztható. Racém vegyületek enzimreakció segítségével való rezolválása Pasteur alapvető munkái óta ismert és gyakran alkalmazott módszerré vált. Ezen belül mikrobiális enzimek alkalmazása igen elterjedt a gyakorlatban olcsóságuk és az alkalmazási technológia egyszerűsége miatt. Norszteroidok szétválasztására Wettstein alkal- 25 mazta először (Experientia 12. 50. 1956), nevezetesen dl-ösztronból élesztővel d-ösztradiolt állított elő, míg az 1-ösztron változatlanul megmaradt. A mikrobiológiai redukción kívül a dehidrogénezés és a hidroxilezés is sok esetben sztereospecifikus, ami azt jelenti, hogy a re- 30 zolváláshoz eredményesen használhatók ezen aktivitással rendelkező enzimek is. A módszer sikeres alkalmazásának előfeltételeként gondos vizsgálattal kell kiválasztani az adott racemát 5 szétválasztására legalkalmasabb enzimet, illetve enzimforrást. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, amely szerves szintézissel előállított, az élővilágban elő nem forduló racém gonaének antipódokra való szétválasztá- 10 sát biztosítja rövid fermentációs idő alatt, könnyen kivitelezhető módszerek alkalmazásával. Esetünkben amikor a természetben elő nem forduló racemátot kell optikai antipódjaira szétválasztani, számos mikroorganizmus biológiai aktivitását kell megvizsgálnunk, amíg a legelőnyösebbet ki tudjuk választani. Smith és mtsai (J. A. C. S. 58. 3120, 1976) racém ösztron 13 ß-alkil homológjainak rezoválására Aspergillus ochraceus tenyészetét használták, mivel ezen mikroorganizmus hidroxilező aktivitása nagy mértékben 20 sztereospecifikus. Greenspan és mtsai (J. Org. Chem. 31. 2512, 1966) Corynebacterium törzs tenyészetét használták fel a racém 12(}-etil-gonén származékok rezol válására. Nevezetesen a dl-13 ß-etil-17 [ï-hidroxi-4-gonén-3-onból Corynebacterium simplex felhasználásával nyerték a d-13[ï-etil-3-hidroxi-l,3,5(10)-gonatrién-17-on-t, mivel ez esetben az aromatizálás volt sztereospecifikus. A találmány alapja az a felismerés, hogy kiválasztható olyan baktérium, amely megfelelő sztereospecificitású hidroxiszteroid-oxidoreduktáz enzimaktivitással rendelkezik, a szteroid alapvázat nem károsítja, viszont sejt-176104
