176101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bisz(nitrozo-ureido)-poliol származékok előállítására
7 176101 8 4. táblázat Tumor Vegyület ■ jelzése Dózis mg/kg a 6. napon i j Gyógyulás 1 (90 napos j túlélés) ! Yoshida sc. sarcoma kifejlett I i 1. 1 50 1 x ip. 5/7 ; Megjegyzés A kifejlett tumor igen 1 2. 1 30 1 x ip. 1 4/7 j nehezen befolyásolható, 7—10 6. í i 1 1 ! 30 1 x ip. j 0/7 1 1 napon belül megöli a kezeletlen j állatokat. III. Vizsgálatok a hatás módjára és tartamára Ehrlich ascites carcinomás egereket kezeltünk az 1,2 és 6 jelzésű vegyület equitoxikus dózisaival egyszer intraperitonálisan az átoltás utáni 6. napon. A hatás tartamát ascites össz-sejtszám, módját pedig mitózis index* és timidin index** meghatározásával vizsgáltuk. Megállapítottuk, hogy az I és 2 jelzésű vegyület mintegy 35 napig az össz-sejtszám növekedését meggátolja, ezzel szemben a 6 jelzésű vegyület gátlása csak 17 napig mutatható ki. A hatás minőségét tekintve az 1 és 2 jelzésű vegyület a mitózis- és timidin-index értéket 24 órán belül 90%-kal csökkenti, a 6 jelzésű vegyület adása után a csökkenés mértéke csak 45—50%, és a 4. napon éri el a maximumát. * mitózis index—osztódó sejtek száma/1000 daganatsejt. ** timidin index=:,H-timidin beépülésének mértéke a daganatsejtek dezoxiribonukleinsavába (DNS). IV. A biológiai vizsgálatok eredményeit a következőkben foglalhatjuk össze: 1. Az I általános képletű vegyületek hatása a legtöbb tumorteszten előnyösebb, több esetben (pl.: Ehrlich ascites carcinoma, P—388 leukémia) nagyságrenddel előnyösebb, mint a referens BCNU-é. 2. Vegyületeink a L—1210 leukémián orálisan is igen hatékonyak, míg a BCNU orális hatékonysága jelentéktelen. 3. A rendkívül rosszindulatú és 7—8 napon belül az állatok pusztulását eredményező Yoshida subcután sarcomát vegyületeink késői, 6. napi egyszeri kezeléssel nagy %-ban meggyógyították,míg a BCNUe rendszeren hatástalannak bizonyult. 4. Egyszeri kezelés hatása vegyületeink esetében jóval tartósabb, mint a BCNU-é. 5. A sejtosztódásra és a dezoxiribonukleinsav szintézisre kifejtett hatás minőségileg is különbözik a BCNU- tól: sokkal gyorsabban jelentkezik, és jóval nagyobb mértékű, mint a BCNU adása után. 6. Vegyületeink orális és parenterális acut toxicitása kedvezőbb, mint a BCNU-é. Az I általános képletű vegyületek gyógyászatilag mind orális, mind parenterális, különösen intravénás injekciós kiszerelésben alkalmazhatók. Az orális alkalmazás történhet tablettában, kapszulában, szuszpenzióban, szirupban, és hasonló kiszerelési formákban; a parenterális felhasználás valamilyen fiziológiásán is alkalmazható oldószerben történhet. A vegyületek felnőttre számított napi dózisa 20— 200 mg. Az alkalmazott dózis függ természetesen a betegség, a szolid tumor vagy leukémia előrehaladottságától, a beteg testsúlyától, korától, általános egészségi állapotától és még számos más tényezőtől, amit a betegség során számításba kell venni, mint pl. a toxicitás, mellékhatások. 15 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa 20 1,4-Bisz[3-(2-klór-etiI)-N-nitrozo-ureido]-1,4-didezoxi-D,L-treit 16,55 g (0,05 mól) l,4-bisz[3-(2-klór-etiI)-ureido]-l,4- 25 -didezoxi-D,L-treit 120 ml vízmentes trifluor-ecetsavas oldatához keverés mellett 0—4 cC-on, kb. 2 óra alatt részletekben 13,8 g (0,2 mól) porított nátrium-nitritet adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0—4 °C-on keverjük, 1200 ml jeges vízzel elegyítjük és további 1 óráig 30 hűtés mellett keverjük. A kivált kristályos terméket izoláljuk, vízzel, éterrel mossuk, majd foszfor-pentoxid felett vákuumban szárítjuk, hozam 9,2 g, op. : kb. 117— 119 °C (bomlás). Az anyalúgból éjszakán át hűtve további 4,4 g kristályos termék válik ki. 35 Vékonyréteg kromatográfia (VRK): Kieselgel 60 HF254+366 (Reanal, Budapest) rétegen diklór-metán— izopropanol (9,5: 0,5) elegyben, Rf=0,30, 0,37, 0,43. A nyers N-nitrozo-származékot szűrőn diklór-metánnal iszapoljuk és rétegesen mossuk, majd tetrahidrofurán- 40 -diklór-metán elegyből és etil-acetátból kristályosítjuk. A kapott termék l-[3-(2-klór-etil)-l-nitrozo-ureido]-4- -[3-(2-klór-etil)-3-nitrozo-ureido]-l,4-didezoxi-D,L-treit, op.: 136—136,5 °C (bomlás), Rf=0,37. Fenti mosás szűrletét és a kristályosítások anyalúgjait 45 egyesítve vákuumban szobahőmérsékleten szárazra pároljuk és az izomerek keverékét kromatográfiás úton elválasztjuk. Ily módon l,4-bisz[3-(2-klór-etil)-3-nitrozo-ureido] [op.: 96—97 C (bomlás), Rf=0,3] és 1,4-bisz[3-(2-klór-eti])-1 -nitrozo-ureidoj-1,4-didezoxi-D,L-treitet 50 [op. : 115—116 °C (bomlás), Rf=0,43] kapunk. A nyers izomer keverék és az elválasztott izomerek elemzése a számítottnak megfelelő. A kiindulási vegyületként használt l,4-bisz[3-(2-klór-etil)-ureido]-l,4-didezoxi-D,L-treitet az alábbi módon 55 állítjuk elő: 6,0 g (0,05 mól) 1,4-diamino-l ,4-didezoxi-D,L-treit [H. R. Meyer és mtsai, Helv. Chim. Acta, 46, 2685 (1963)] 70 ml vízben készült oldatához erőteljes keverés mellett, 0—2 °C-on 11,0 g (0,105 mól) 2-klór-etil- 60 -izocianátot csepegtetünk. 3,5 óra keverés és hűtés után a kivált fehér kristályos terméket leszívatjuk, vízzel, etanollal majd éterrel mossuk, hozam 14,9 g; op. : 149— 150 °C. VRK: Kieselgel G rétegen, etil-acetát—víz—ecetsav 65 (15: 2: 2)elegyben Rf=0,52. 4
