175950. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új egymagvú coriolus versicolor micelium előállítására
5 175950 6 24 óráig állni hagyjuk és az oldatot leszűrjük. Az így készített törzs-oldatot foszforsav puffer oldat (pH=6,4—6,8) hozzáadásával 3 ml törzs-oldatra számítva 100 ml térfogattal hígítjuk. A fent leírt módszerrel végzett mérések eredményeképpen azt találtuk, hogy az egy sejtben levő sejtmagok száma egy pirula alakú micéliumban 2, míg a találmány szerinti szuszpenzió típusú micéliumban egy sejtmag van. A fent felsorolt különleges tulajdonságokkal rendelkező monokarionos micéliumot a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy Coriolus versicolor (Fr.) Quél. dikarionos (magpáros) micéliumot mechanikus (fizikai) kezelésnek, például őrlésnek, nyírásnak, vetjük alá folyékony közegben vagy a dikarionos micéliumot süllyesztetten tenyésztjük, mialatt a micéliumot mechanikusan kezeljük. Konkrétan az eljárást a következőképpen hajtjuk végre. 1. Ha a Coriolus versicolor (Fr.) Quél. dikarionos micéliumot rázva tenyésztjük, akkor a micélium őrlése úgy történik, hogy közömbös szilárd szemcsés anyagokat, például’üveggyöngyöket adunk a fermentációs közeghez. 2. Ha a dikarionos micéliumot folyamatosan süllyesztett tenyésztésnek vetjük alá, akkor a tenyésztés közben a micéliumot keveró'vel nyírjuk. 3. Ha a dikarionos micéliumot süllyesztett tenyésztésnek vetjük alá, a micéliumot homogenizálóval őröljük vagy nyírjuk, olyan mértékben, hogy a külső megfigyelésnél ne találjunk pirula formájú micéliumot. Ha a monokarionos micéliumot a fent leírt módon állítjuk elő, előnyösen a következő lépéseket alkalmazzuk utólagosan. a) Tápanyagban dúsított állapotot hozunk létre, ha 1,5—3-szor akkora koncentrációjú táptalajt alkalmazunk, mint rendszerint, például 5% glükózt és 0,75% élesztő kivonatot tartalmazó glükóz-élesztő-kivonat táptalajt használunk. b) A süllyesztett tenyészet nyomását csökkentett oxigén parciális nyomás alatt tartjuk. A „csökkentett oxigén parciális nyomást” úgy kapjuk, hogy a fermentort légmentesen tartjuk vagy iners gázt, például nitrogén gázt vagy széndioxidot áramoltatunk a fermentorba. c) A süllyesztett tenyésztést folyamatosan végezzük, miközben mindig újabb folyékony táptalajt adunk hozzá. A Coriolus versicolor (Fr.) Quél. dikarionos micéliumot könnyen átalakíthatjuk monokarionos micéliummá, ha a fenti lépéseket (1-3.) önállóan vagy az a-c. lépésekkel kombinálva hajtjuk végre. Ha egy tenyészet nem elegendő mennyiségű monokarionos (egymagvú) micélium előállításához, a fenti műveletet addig végezzük a homogenizálás után, amíg a kívánt mennyiségű monokarionos micéliumokat meg nem kapjuk. A tenyésztést általában 25 + 5 °C-on végezzük 3—15 napig. Azt találtuk, hogy a találmány szerint kapott Coriolus versicolor (Fr.) Quél. monokarionos micé- Ihim mindig azonos állapotban marad és a tulajdonságait is megőrzi, ha a tenyésztést a monokarionos micélium előállításánál fent említett feltételek mellett végezzük. Ez azt jelenti, hogy a találmány szerint kapott monokarionos micélium a következő generációban is ugyanolyan monokarionos micéliumként jelentkezik, megőrizve az 1. táblázatban mutatott tulajdonságokat. A monokarionos micélium lemez tenyészetben vagy felületi tenyészetben nem könnyen képez légmicéliumot, de ha több hónapig folytatjuk a tenyésztést, akkor keletkeznek légmicéliumok. Ez a légmicélium magpáros és ha egy ágyszelvénybe oltjuk, hogy gyümölcstesteket képezzen, akkor ezek Coriolus versicolor (Fr.) Quél.-nek bizonyulnak. Eszerint a keletkezett micélium azonos az eredetivel. A fenti tények arra mutatnak, hogy a Coriolus versicolor (Fr.) Quél. a találmány szerinti monokarionos micélium a Coriolus versicolor (Fr.) Quél. eredeti dikarionos micéliumából származik. A találmány szerinti monokarionos micélium új micélium, amelyet először a találmány szerinti módszerrel tenyésztettünk ki és ezt az új micéliumot Coriolus versicolor (Fr.) Quél. GX-101-3-nak neveztük el és FERM-P 3686 számon deponáltuk 1976. augusztus 25-én a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology (Chiba-shi, Japán) japán intézetnél. A találmány szerinti Coriolus versicolor (Fr.) Quél. monokarionos micélium jellegzetes vonásait az 1. táblázat mutatja, azonban ennek a gombának a legnagyobb jelentősége abban van, hogy nagy a szaporodási sebessége. A gomba szaporodási sebessége 1,5-10-szerese a eredeti dikarionos micélium szaporodási sebességének és nyilvánvalóan az üyen nagy szaporodási sebesség az ipari előállítás számára igen hasznos. A monokarionos micélium felhasználási területe azonos a dikarionos Coriolus versicolor (Fr.) Quél. micélium felhasználási területével. Így például nitrogén-tartalmú poliszacharidokat kaphatunk, ha vizes táptalajból, például vízből, híg alkálikus oldatból vagy híg savoldatból kivonjuk és a nitrogén-tartalmú poliszacharidot gyógyszer, például tumorgátló szer, immunitás aktiváló szer, virus ellenes gyógyszer, gombaölő szer, lepra ellenes szer, étvágygerjesztő szer előállítására használjuk. Alacsony hőmérsékleten végzett extrakcióval különböző enzimeket, például proteázt, amilázt, stb. is izolálhatunk. A micéliumot magát vagy kivonatait vagy maradékait élelmiszer vagy ital előállítására is alkalmazhatjuk, valamint állati takarmány vagy növényi műtrágya előállításához is felhasználhatjuk. A fent említettek mellett a találmány szerint előállított micéliumot a Coriolus versicolor (Fr.) Quél. valamennyi alkalmazási területén felhasználhatjuk. A találmány további részleteit a következő nem-korlátozó jellegű példákkal szemléltetjük. A százalékos értékeken súlyszázalék értendő. 1. példa Monokarionos (egymagvú) micélium előállítása 100 ml 5% glükózt (Showa Sangyo Col Ltd.) és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
