175838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Corynebacterium glutamicum mikroorganizmustörzs szelekciójára
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 175838 JSÈL Nemzetközi osztályozás : Bejelentés napja : 1978. IX. 22. (SO—1232) C 12 K 1/06 Elsőbbsége: Csehszlovákia: 1977. IX. 24. (PV 6197—77) ORSZÁGOS Közzététel napja: 1980. IV. 28. TALÁLMÁNYI HIVATAL Megjelent: 1981. VI. 30. Feltalálók : Szabadalmas : Dr. Plachy Jiri, vegyész, Roztoky, Dr. Culik Karel, vegyész, Prága, Ulbert Spofa spojené podniky pro Stanislav, mérnök, Prága, Bucko Michal, mérnök, Banska Bystrica, Chromik zdravotnickou vyrobu, Prága, Jindrich, mérnök, Prága, Vanicky Miroslav, vegyész, Roztoky, Hofbauer Csehszlovákia Henrich, mérnök, Banska Bystrica, Mikiás Emil, mérnök, Banska Bystrica, Severa Zdenek, mérnök, Prága, Hano Alexander, mérnök, Banska Bystrica, Dr. Sikyta Bohumil, vegyész, Prága, Csehszlovákia Eljárás a Corynebacterium glutamicum mikroorganizmustörzs szelekciójára 1 A találmány tárgya eljárás a Corynebacterium glutamicum mikroorganizmus-törzs szelektálására. A találmány továbbá a Corynebacterium glutamicum CCM 3287 mutánsra vonatkozik, amely lizint termel, lizin-analóggal szemben ellenálló és fejlődéséhez homoszerin szükséges. 1970-ig a lizin fermentációs előállítására leggyakrabban homoszerintől függő auxotrof mutánsokat használtak. Sano és Shiio (J. Gen. Appl. Microbiol. 16, 373 (1970)] a Brevicaterium flavum olyan mutánsát írták le, amely S-(2-aminoetil)-L-ciszteinnek, a lizin egy analógjának és treoninnak a jelenlétében szaporodott, míg a prototrof szülőtörzs fejlődését ezek a vegyületek gátolták. A rezisztens mutánsok (AECr) hatására a táptalajban 32 g/liter töménységben termelődött lizin. Az említett rezisztens mutánsok képessége nagy mennyiségű lizin termelésére nem egyedülálló jelenség; más, potenciálisan lizin-termelő fajták is ismertek. Ezeknek a fajtáknak az esetében az S-(2-aminoetil)-L-ciszteinnel szemben mutatott rezisztencia általában együttjár az auxotrofiával. Ilyen genetikai jellemzőkkel rendelkező törzsek többek között a következők: Corynebacterium glutamicum ATCC 21526 (AECr, homoszerin-, leucin-, lizintermelő képessége 32,5 gramm/liter) és a 2 321 461 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalomban leírt törzsek, amelyek a lizin-analóggal szemben mind rézisktensek, aminosavak (szerin, prolin, Ieucin, alanin), vitaminok (B12), valamint nukleinsavalkotórészek (guanin) szükségesek a fejlődésükhöz, és 2 30—40 gramm/liter töménységben képesek a táptalajban lizint felhalmozni. A lizin ipari méretekben történő fermentációs előállítására a fent említett törzsek lizint termelő képessége 5 nem elegendő. Ezért szükséges volt olyan törzset vagy mutánst keresni, amely viszonylag rövid idő alatt nagy mennyiségű lizint termel, és fejlődéséhez nem szükségesek különleges fajtájú és minőségű anyagok. A fenti célra állítottuk elő a Corynebacterium gluta- 10 micum egy új törzsét, amelyet a csehszlovák mikroorganizmust gyűjtő állomáson (J. E. Purkyne Egyetem, Brno, Obráncű mini sugárút 10.) CCM 3287 jelzés alatt helyeztünk letétbe. A találmány tárgya a Corynebacterium glutamicum CCM 3287 jelzésű új mutáns és el- 15 járás a mutáns előállítására. A Corynebacterium glutamicum szelektálását úgy végezzük, hogy a prototrof szülő törzs tenyészetéhez 0,03—0,08 M töménységű etil-metánszulfonát oldatot adunk és 15—21 órán keresztül inkubáljuk. A talál- 20 mány szerinti eljárás előnyös kiviteli alakja, ha az inkubálást 0,05 M töménységű, 7,2 pH-értékű foszfát-pufferral készült etil-metánszulfonát oldatban 18 órán keresztül végezzük. A mutagén szerrel kezelt tenyészethez ezután tápanyag-oldatot adunk, majd a keletkezett mu- 25 tánsok elkülönítése céljából a tenyésztést S-(2-amino* etil)-L-ciszteint és L-homoszerint tartalmazó minimáltáptalajon, vagyis szerves nitrogénforrást nem tartalmazó táptalajon folytatjuk. A minimál-táptalaj milliliterenként előnyösen 10 mg S-(2-aminoetil)-L-ciszteint 30 és 0,001 mg L-homoszerint tartalmaz. 175838
