175826. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenolok és oligoszacharidok extrakciójára növényi szövetekből
5 175826 6 ban 40 °C-on szárazra pároljuk. A fenolos vegyiileteket és oligoszacharidokat szobahőmérsékleten mért mennyiségű abszolút metanollal extraháljuk; a szuszpenziót centrifugáljuk és a felül úszó folyadék egy részletét nitrogénáramban szobahőmérsékleten szárazra pároljuk, majd a maradékot ismert mennyiségű TRI-SIL'Z'-vel szililezzük, 2 órán át 60 °C hőmérsékleten való inkubálással. A TR1-SIL a Pierce Chemical Co. által gyártott N-trimetilszililimidazol. Gázkromatográfiás körülmények A gáz-folyadék kromatográfiás elemzést HP 7620 A gázkromatográfiái végezzük, amelyet HP 3380 A automatikus integrátorral láttunk el. A kísérleti körülmények a következők : üvegoszlop 3,2 mm x 2,3 m stacionárius fázis OV—1, 3%, 0,177/0,149 mm lyukbőségű Chromosorb WHP-n injektor-hőmérséklet 300 °C detektálási hőmérséklet 300 °C oszlop 150 °C 4 percen át, 150 °C— 260 °C 6 °C/perc sebességgel 260 °C 30 percen át vivőgáz hélium áramlási sebesség 35 ml/perc detektor lángionizátor A szójalisztek esetében az oligoszacharidok elemzését a következő változtatásokkal hajtottuk végre: oszlophőmérséklet 150 °C 4 percen át, 150 °C— 250 °C 6 °C/perc sebességgel 250 °C 10 percen át, 250 °C— 320 °C 15 °C/perc sebességgel 320 °C—340 °C 10 °C/perc sebességgel, 340 °C 30 percen át injektor-hőmérséklet 350 °C detektor-hőmérséklet 350 °C A kivonatokban az o-difenolokat és az oligoszacharidokat a megfelelő tiszta vegyületek retenciós idői alapján azonosítottuk. A számos csúcs kvantitatív elemzését az automatikus integrátorral hajtottuk végre. A kivonatokhoz adott ismert mennyiségű klorogénsavat, kaffeinsavat, szacharózt, raffinózt és sztachiózt kvantitatív kitermeléssel visszanyertük. Elektroforézis Az elektroforetikus elemzést 7,5%-os poliakrilamid gélen végeztük egy függőleges berendezésben trisz-glicin felhasználásával pufferként, pH 9,5-n (B. Davis, Ann. N. Y. Acad. Sei. 121, 404, 1964). A növénylisztek előállítása A fenolok és oligoszacharidok extrakciójának alávetendő liszteket a következőképpen állítottuk elő: a teljesen lehántolt napraforgómagot, gyapotmagot és szójababot +4 °C-on egy Sörvall-f. Omni-Mixer homogenizátorban megőröltük n-hexán jelenlétében, 1 : 2 mag/oldószer arány mellett. A liszteket ezután n-hexánnal zsírtalanítottuk 1 : 10 súly/térfogat arány mellett, 16 órán át 25 °C-on való kevertetéssel. Az oldószert vákuumban végzett szűréssel távolítottuk el, szűrő szivattyúval, porcelán Büchner-tölcséren, Whatman No. 4 szűrőpapír alkalmazásával. A liszteket nitrogénáramban szárítottuk 1 órán át 25 °C-on és egy Bühler-f. berendezéssel 2. finomsági fokra őröltük. A száraz termék vegyi összetételét (nedvesség, fehérjék, lipidek és nyersrost) standard módszerekkel határoztuk meg. A napraforgómaglisztben és a szójalisztben a fenol- és oligoszacharid-tartalmat gázkromatográfiás módszerekkel határoztuk meg. 1. példa Klorogénsav extrakciója napraforgómagolajból Az extrakcióhoz használt oldószer előállítása a következőképpen történt. 1 liter n-butilalkoholt összekeverünk 1 liter vizes, 0,5 • 10 2N sósavoldattal pH 2,48-on, mi mellett a folyadékot időnként kevertetjük és éjjelen át választótölcsérben állni hagyjuk. A felső fázis, amelyet a vizes-savas fázis elvetése után összegyűjtünk, az extrakciós műveletekhez használható oldószer. A fent leírt módon előállított napraforgómaglisztet megszitáljuk Fritsch Analysette 3 alkalmazásával (0,050 mm kötéstávolságú szitaberendezés) és oldószert adunk hozzá 1/30 súly/térfogat arányban, 30 percen át 30 °C-on való keverés mellett. A szuszpenziót 5000 ford./perc sebességgel Sörvall RB—2 centrifugával (SS—34 rotor) centrifugáljuk szobahőmérsékleten 10 percen át. A felül úszó folyadék dekantálása után az extrakciót a fenti módon többször egymás után megismételjük az oldószerrel (5—10 extrakció). Az extrakciós kísérlet menetét úgy követjük, hogy mérjük minden butanolos kivonat abszorpcióját 328 nm-cn, az oldószerben oldott klorogénsav abszorpciós maximumának hullámhoszszán. A klorogénsav abszorpciós együtthatója (A/'“j*£'1) ezen a hullámhosszon 51,3. Miután az oldószeres extrakciót befejeztük, a szilárd fázist nitrogén-atmoszférában 3 órán át szárítjuk és az AOAC 14.025 sz. módszerrel meghatározzuk ezen anyag maradék klorogénsavtartalmát. 2—5. példa Fenolok és oligoszacharidok extrakciója napraforgómaglisztből, gyapotmaglisztből és szójalisztből A fenolok és oligoszacharidok napraforgómaglisztből, gyapotmaglisztből és szójalisztből való extrakciójához az oldószer előkészítését a következőképpen végeztük. 92 rész n-butilalkoholt 8 rész vizes sósav-oldattal alaposan összekeverünk pH 2,30-on. A kapott oldószert különböző liszt/oldószer arányokban adjuk hozzá az extrahálandó liszthez, különböző hőmérsékleteken, 15 percen át való keverés mellett. A szuszpenzió pH-ját a lisztben levő fehérjék minimális oldhatósági intervallumában állandó értéken tartjuk. A pH állandóságát úgy érjük el, hogy a kevert szuszpenzióhoz 0,5N sósavat vagy egy pH 0,5 oldatot adunk, amely 92 rész n-butanolból és 8 rész vizes sósav-oldatból áll. A szuszpenziót Whatman No. 3 szűrőpapíron szűrjük és a maradékkal a fent leírt módon (2—8-szor) megismételjük az extrakciót. Az extrakciók befejezése után az így kapott 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
