175826. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenolok és oligoszacharidok extrakciójára növényi szövetekből
7 175826 8 fehérjekoncentrációt nitrogénáramban szárítjuk legalább 3 órán át. A száraz anyagból vett különböző mintákban meghatározzuk a kémiai összetételt (nedvesség, fehérjék, lipidek és nyersrost). Meghatározzuk ezeknek a koncentrátumoknak a maradék klorogénsav-, kaffeinsav-, gosszipol-, szacharóz-, raffinóz- és sztachióz-tartalmát. A vonatkozó eredményeket a későbbiekben a 7—-10. példák tartalmazzák. Fehérjeizolátumok előállítása A fent leírt eljárással kapott fehérjekoncentrátumokat két különböző fehérjeextrakciós eljárásnak vetettük alá : egy egylépéses, nem szelektív extrakciós eljárásnak és egy második, kétlépéses extrakciós eljárásnak, amelynek során elkülönülnek egymástól a kis molekulasúlyú, nagy elektroforetikus mozgékonyságú vízoldható fehérjék és azok a fehérjék, amelyek oldhatók lúgos közegben, nagy molekulasúlyúak és alacsony elektroforetikus mozgékonyságúak. A kétlépéses extrakciós eljárás két izolátumot szolgáltat, amelyek összetétele és tulajdonságai eltérők. Egylépéses extrakció Az extrakciós eljárásból származó fehérjekoncentrátum egy hányadát 15 rész vízben szuszpendáljuk, a pH-t 0,2N NaOH-dal 9,5-re állítjuk (1/15 súly/térfogat liszt/ oldószer arány mellett) és 30 percen át 25 °C-on kevertetjük. A zagyot 17 000 ford./perc sebességgel 20 percen át centrifugáljuk SS—34 rotorral ellátott Sörvall RB—2 centrifugával. A maradékkal azonos körülmények között megismételjük az extrakciót. A két felül úszó folyadékot egyesítjük és a fehérjéket 0,5N HCl-val az izoelektromos ponton kicsapjuk. A csapadékot 17 000 ford./perc sebességgel 10 percen át való centrifugálással ülepítjük, majd vizes sav-oldattal mossuk. A fehérjecsapadékot vizes közeggel felvesszük, pH 7,0-ra semlegesítjük és fagyasztva szárítjuk. A csapadékban, a felül úszó folyadékban és az oldhatatlan maradékban elvégezzük az össz-nitrogén Kjeldahl-módszerrel való meghatározását. Kétlépéses extrakció I. A fehérjekoncentrátum egy hányadát 15 rész vízzel kezeljük pH 6,5-en 30 percen át való kevertetés mellett, 25 °C-on (liszt/oldószer súly/térfogat arány 1 : 15). A szuszpenziót 17 000 ford./perc sebességgel centrifugáljuk 20 percen át és a maradékot még egyszer azonos körülmények között extraháljuk. A két felül úszó folyadékot egyesítjük és elvégezzük a fehérjék kicsapását az izoelektromos ponton. A csapadékot savas oldattal mossuk, vízben újra szuszpendáljuk, pH 7,0-ra semlegesítjük és fagysztva szárítjuk. II. Az első extrakciós lépésből származó oldhatatlan maradékból elvégezzük a fehérjék kioldását lúgos közegben, pH 9,5-en, az egylépéses extrakciós eljárásra leírt körülmények között. A további részleteket a következő példákban közöljük a találmány jobb megértése érdekében, ez azonban nem tekinthető a találmány szerinti eljárás korlátozásának. 6. példa A klorogénsav extrakciója az Amiata (Jenisei) változatú napraforgómagból A magvak kémiai összetétele a következő : nedvesség 3,8% száraz anyagra vonatkoztatva: fehérjék (N.6,25) 24,9% lipidek 58,7% klorogénsav 1,9% nyersrost 2,4% nem-nitrogén kivonatanyagok 8,7% hamu 3,4% Az eljárásban alkalmazott napraforgómagliszt összetétele a következő: nedvesség 8,8% száraz anyagra vonatkoztatva : fehérjék (N.6,25) 64,6% lipidek 1,0%-nál kevesebb klorogénsav 4,8% nyersrost 3,9% 10 gramm 0,050 milliméter szemcsenagyságú lisztet egy lombikban 300 ml, 1. példa szerinti oldószerrel kevertetünk 30 percen át 30 °C-on. A keveréket 5000 ford./perc sebességgel 10 percen át szobahőmérsékleten centrifugáljuk, dekantáljuk és az extrakciót 300 ml friss oldószerrel megismételjük. Ezt a kezelést összesen nyolcszor ismételjük meg (az összliszt/oldószer arány 1/240). Az egyes kivonatok klorogénsav-tartalmát spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg 328 nm-en oldószer-vakkal szemben, amint ezt az I. táblázatban feltüntetjük. I. táblázat Az extrakciók száma Extrahált klorogénsav milligramm/10 gramm í 203,5 2 99,2 3 53,8 4 31,0 5 19,3 6 7,8 7 6,2 8 4,3 A nyolc extrakció maradékát nitrogénáramban 3 órán át szárítottuk, majd meghatároztuk klorogénsav-tartalmát az AOAC 14.025 módszer szerint. A nyolcadik extrakció után a klorogénsav-tartalom 0,2%-nál alacsonyabb. 7. példa Protein-koncentrátumok és -izolátumok előállítása az Amiata (Jenisei) napraforgómagból aj Az o-difenoloktól és oligoszacharidoktól mentes fehérjekoncentrátumok előállítása. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
