175645. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4,5,6,7-tetrahidro-tieno(2,3-c) és(3,2-c) piridinek előállítására
11 175645 12 II. Táblázat 1. példa 13. példa 23. példa 1 27. példa Az agglomerátum Kontroll szerinti származék nagysága 25 50 100 200 25 50 100 200 25 50 100 200 25 50 100 200 (ág (ág (tg Hg (*g Hg (tg (ig E*g f*g (tg (tg (tg (tg (tg (tg 1 * (szabad R.C.) 33 64 69 86 89 65 68 87 90 60 65 78 83 62 66 75 84 2 22 25 24 7 9 26 23 8 9 21 25 14 11 16 20 15 9 3 13 11 5 4 2 9 5 3 1 16 6 5 4 17 10 7 5 4 6 0 2 3 0 0 4 2 0 3 4 1 2 5 4 3 2 5 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 6 ' 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 7 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 8 4 0 0 0 0 0 0 0 ' 0 0 0 0 0 0 0 0 0 9 ' 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 11 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 12 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 13 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 *(R.C.)=vörös vértestek III. Táblázat Az agglomerátum nagysága Kontroll 1. 5. 13. 15. 23. 26. 27. 29. 1 (szabad részecskék) 26 84 86 86 87 85 86 87 87 2 22 12 11 9 11 10 12 -10 9 3 9 3 3 5 2 4 2 3 2 4 6 1 0 0 0 1 0 0 1 5 7 0 0 0 0 0 0 0 0 6 9 0 0 0 0 0 0 0 0 7 6 0 0 0 0 0 0 0 0 8’ ■ 3 0 0 0 0 0 0 0 0 9 1 0 0 0 0 0 0 0 0 10 1 0 0 0 0 0 0 0 0 Megjegyzés: minden vegyületből 25 jj-g-ot használtunk. 1. In vitro vizsgálatok Háromszor kimosott patkány-vörösvérsejteket fiziológiás sóoldattal 1/250-re hígítottunk. Ebből a szuszpenzióból 0,6 ml-t és 1,2 ml fiziológiás sóoldatot helyeztünk kémcsövekbe. Minden kémcsőhöz hozzáadtunk 0,2 ml olyan oldatot, ami a vizsgált származékokból rendre 0, 25, 50, 100 és 200 fig-ot tartalmazott. Miután a mintákat 1 óráig 37 °C-on tartottuk, 0,2 ml olyan oldatot adtunk hozzá, amely ml-enként 125 [zg protaminszulfátot tartalmazott, majd ismét 37 °C-on tartottuk azokat 0,5 óráig. Ezután valamennyi csőben megvizsgáltuk a vörös vérsejteket Mallases cellában, és a szabad vörösvérsejtek százalékának, illetőleg a 2,3,4,5 stb. vörösvérsejtből álló csomók százalékának arányát feljegyeztük. Ennek a „preventív” kezelésnek az eredményeit a II. táblázat tartalmazza. Ez a vizsgálat az (I) és (II) általános képletű vegyületeknek a vérsejt összetapadását-gátló tulajdonságát demonstrálja. A kísérletet „kurativ” jelleggel is megismételtük. A vörös vérsejteket először protamin-szulfáttal hoztuk érintkezésbe, majd 0,5 óráig tartó inkubálás után 25 jzg vizsgálandó származékot tartalmazó 0,2 ml oldatot adtunk hozzá. Ezt követően 1 óráig 37 °C-on tovább in- 45 kubáltuk. Az eredményeket a III. táblázat tartalmazza, amelyben a százalékos összecsomósodásokat a méretek függvényében jellemezzük. Láthatjuk, hogy a referencia-vizsgálat szabad részecskéi és a találmány szerinti származékokkal befolyásolt 50 vizsgálat részecskéi között igen nagy különbség van. 2. In vivo vizsgálatok 200—300 g súlyú Wistar patkányokat 2,5 mg/kg, 55 intraperitoneálisan adagolt pentabarbitállal elaltattunk. Medián laparotómia után egy bélkacsot mezenteriumával együtt izoláltunk és egy petri csészében levő 37 °C-os Ringer oldatba helyeztünk mikroszkóp alatt (25 x 10). A vizsgálat során a mezenterium artériájában normális 60 keringést észleltünk. Közvetlen , a juguláris vénába történt 25 mg/kg protamin-szulfát injektáló hatására vérsejt-csomósodás létrejöttét észleltük pangással együtt néhány artériában. 1 mg/ml valamint 0,1 mg/ml vizsgált származékot tartalmazó 0,2 ml oldatot injektáltunk 65 ezután a juguláris vénába. A kontroll állatok csak 6
