175575. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kanamicin-származékok előállítására
11 175575 12 eltávolítása útján nyerjük ki a kívánt L-(—)-y-amino-a-hidroxi-vajsavat. Az L-(—)-y-amino-a-hidroxi-vajsav 212,5—214,5 °C olvadáspontú kristályos anyag (3 541 078 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 2. hasáb, 31—38. sor). 6. 6'-Karbobenzoxi-kanamicin B 8,1 g (0,0168 mól) kanamicin B 120 ml vízzel és 80 ml 1,2-dimetoxi-etánnal készült, behütött oldatához keverés közben becsepegtetjük 4,2 g (0,0168 mól) N-(benziloxi-karbonil)-oxi-szukcinimid 40 ml 1,2-dimetoxi-etánnal készült oldatát. Éjszakán át kevertetjük a reakcióelegyet, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket. 100 ml vízben oldjuk a maradékot, majd kétszer 50—50 ml, vízzel telített n-butanollal kirázzuk az oldatot. Elválasztjuk a vizes részt, majd felvisszük egy 100 ml NH4+-fázisú CG—50 ioncserélőt tartalmazó oszlopra. 200 ml vízzel mossuk az oszlopot, majd 0,05 normál ammónium-hidroxiddal eluáljuk. 10 ml-es eluátum-frakciókat szedünk. A 121—180. frakciót egyesítjük, az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékot liofilizáljuk. Ily módon 1,58 g (15%) terméket nyerünk. Az 1—120. frakcióról ledesztilláljuk az oldószert, és a maradékot CG—50 (NH4+-fázisú) ioncserélő gyantán újra krömatografáljuk, ily módon 1,21 g (12%) terméket nyerünk. Olvadáspont: 151—152 °C (bomlik). [*]d = 104° (c = 2,5, H20). vco 1710 cm1. Analízis C26H43N5Ö12 képletre: számított: C 50,56, H 7,02, H 11,34%, talált : C 50,71, H 7,38, N 11,48%. Vékonyréteg-kromatográfiás (F254-es szilikagél) Rfértékek: n-propanol—piridin—ecetsav—víz 15:10:3:12 arányú elegyében: 0,03; aceton—ecetsav—víz 20:6:774 arányú elegyében: 0,16. 7. L-(—j-y-Amino-a-hidroxi-vajsav előállítása DL-a-hidroxi-y-ftáíimido-vajsavból A) L-a-hidroxi-y-ftálimido-vajsav-debidro-abietil-ammónium-só: 25 g (0,1 mól) «-hidroxi-y-ftálimido-vajsav3 200 ml etanollal készült oldatát 29 g (0,1 mól) dehidro-abietil-amin 130 ml etanollal készült oldatához adjuk. Egy percen át erélyesen rázogatjuk az elegyet, majd 5 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni. Ezalatt finom tűs kristályok válnak ki az oldatból. Ezeket kiszűrjük, 50 ml etanollal mossuk, majd levegőn szárítjuk. Ily módon a dehidro-abietil-ammónium-só egyik diasztereomerjéből 30,1 g-ot (56%) nyerünk. Olvadáspont: 93—94 °C, [aH?=15° (c=2,5, metanol). 300 ml etanolból átkristályosítva 23,2 g (43%) tiszta terméket nyerünk, olvadáspont: 94—95 °C, [afë=10,8° (c=2,5, metanol). A terméket még egyszer átkristályosítva, annak olvadáspontja és fajlagos forgatóképessége már nem változik. B) L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-vajsav 1,5 g (0,014 mól) nátrium-karbonát 40 ml vízzel készült oldatához 5,3 g (0,01 mól) L-a-hidroxi-y-ftálimido-vajsav-dehidro-abietil-ammónium-só 60 ml éterrel készült oldatát adjuk. Erélyesen rázogatjuk az elegyet, amíg az összes szilárd halmazállapotú anyag feloldódik. Elválasztjuk az éteres fázist. A vizes fázist kétszer 20 ml éterrel mossuk, majd csökkentett nyomáson kb. 15 mire betöményítjük. 10 ml tömény sósavat adunk a koncentrátumhoz, majd 10 órán át forraljuk az elegyet. Lehűlés után a kikristályosodott ftálsavat kiszűrjük. A szűrletről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. 10 ml vízben feloldjuk a maradékot, majd szárazra desztilláljuk az oldatot. A fölös sósav eltávolítása céljából ezt a műveletet kétszer megismételjük. 10 ml vízben feloldjuk a maradék szirupot, és az oldhatatlan ftálsav eltávolítása céljából megszűrjük. A szűrletet egy IR—120 ioncserélő gyantával töltött oszlopra visszük fel (H4+, 1 x35 cm), 300 ml vízzel mossuk az oszlopot, majd 1 normál ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. A pozitív ninhidrin-reakciót mutató 1—16. frakciót egyesítjük, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, így egy fokozatosan kikristályosodó szirupot nyerünk. A kristályokat etanollal eldörzsöljük, kiszűrjük, és csökkentett nyomáson, exszikkátorban szárítjuk. Ily módon 0,78 g (66%) L-(—)-y-amino-a-hidroxi-vajsavat nyerünk. Olvadáspont: 206—207 °C, [aß= —29° (c=2,5 H20). A termék IR-spektruma azonos az ambutirozinból nyert autentikus mintáéval. 8. L- ß-Benziloxi-karbonil-amino-a-hidroxi-propionsav 8,2 g (0,078 mól) L-ß-amino-a-hidroxi-propionsavat* 6,56 g (0,0164 mól) nátrium-hidroxid 60 ml vízzel készült oldatában oldunk. Keverés mellett, 5 °C alatti hőmérsékleten becsepegtetünk az oldatba 14,7 g (0,086 mól) karbobenzoxi-kloridot. Szobahőmérsékleten egy órán át keverjük az elegyet, majd 60 ml éterrel mossuk, és pH-ját híg sósav segítségével 2-re állítjuk be. A csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk, és levegőn szárítjuk, ily módon 9,65 g (52%) terméket nyerünk. A szűrletet ötször 100 ml éterrel kirázzuk, az éteres oldatot vízzel mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, így további 2,0 g (11%) terméket nyerünk. Összesen 11,65 g nyersterméket 500 ml benzol-etil-acetát 4 : 1 arányú elegyéből átkristályosítva 9,36 g (50%) tiszta termékhez jutunk, olvadáspont: 128,5—129,5 °C. IR-spektrum (KBr): vc0 1745, 1690 cm"1, [a£5=2,9° (c=5,0, metanol), NMR- spektrum (DMSO—d6): 8 (ppm): 3,05—3,45 (2H, m, CH2N), 4,05 (1H, d—d, —O—CH—CO), 5,03 (2H, s, CH2Ar), 7,18 (1H, széles, NH), 7,36 (5H, s, gyűrűhidrogének). Analízis CuH,3N05 képletre: számított: C 55,23, H 5,48, N 5,86%, talált : C 55,34, H 5,49, N 5,87%. * K. Freudenberg, Ber., 47, 2027 (1914). 9. L- ß-Benziloxi-karbonil-amino-a-hidroxi-propion-sav-N-hidroxi-szukcinimid-észtere 478 mg (2 millimól) L- ß-benziloxi-karbonil-amino-«-hidroxi-propionsav és 230 mg (2 millimól) N-hidroxi-szukcinimid 10 ml tetrahidro-furánnal készült oldatához hűtés és keverés közben hozzáadunk 412 mg (2 millimól) diciklohexil-karbodiimidet. Egy órán át 0—5 °C-on keverjük az elegyet, utána két órán át szobahőmérsékleten, majd az N,N'-diciklohexil-karbamid eltávolítására megszűrjük. A következő reakciólépéshez izolálás nélkül használjuk a terméket tartalmazó szűrletet: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
