175575. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kanamicin-származékok előállítására
9 175575 10 Analízis C,2Hí5N05 képletre: számított: C 56,91, H 5,97, N 5,53%, talált: C 56,66, H 5,97, N 5,47%. 2. L-(—)-y-benziloxi-karbonil-amino-oc-hidroxi-vajsav-N-hidroxi-szukcinimid-észter 10,6 g (0,042 mól) L-(—)-y-benziloxi-karbonil-amino-a-hidroxi-vajsav és 4,8 g (0,042 mól) N-hidroxi-szukcinimid1 200 ml etil-acetáttal készült oldatát 0 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 8,6 g (0,042 mól) diciklohexil-karbodiimidet. Egy éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk az elegyet. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és kb. 50 ml térfogatra betöményítjük az elegyet csökkentett nyomáson. A kivált színtelen kristályos terméket kiszűrjük, súlya 6,4 g, olvadáspont: 121—122,5 °C. A szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, és a kristályos maradékot 20 ml benzol-hexán-eleggyel mossuk, így további anyagmennyiséget nyerünk. Össztermelés: 13,4 g (92%). [a]D=l,5° (c=2, CHClj). Infravörös spektrum (KBrpasztillában): vco 1810, 1755, 1740, 1680 cm“1. NMR- spektrum (deutero-acetonban), 8 (ppm, TMS-hez viszonyítva): 2,0 (2H, m), 2,83 (4H, s), 3,37 (2H, d—d, J=6,5 és 12,5 Hz), 4,56 (1H, m), 4,99 (2H, s), 6,3 (2H, széles), 7,23 (4H, s). Analízis C16Hi8N207 képletre: számított: C 54,85, H 5,18, N 8,00%, talált: C 54,79, H 5,21, N 8,14%, 54,70, 5,20, 8,12%. 1 G. W. Anderson et al., J. Amer. Chem. Soc. 86, 1839 (1964) 3. N(Benziloxi-karbonil)-oxi-szukcinimid 23 g (0,2 mól) N-hidroxi-szukcinimidet2 9 g (0,22 mól) nátriumhidroxid 200 ml vízzel készült oldatában oldunk. Az oldathoz keverés és vizes hűtés mellett 34 g (0,2 mól) karbobenzoxi-kloridot csepegtetünk, majd éjszakán át szobahőmérsékleten ke vertetjük az elegyet. A kivált karbobenzoxi-származékot kiszűijük, vízzel mossuk, és levegőn szárítjuk- Termelés: 41,1 g (82%). Benzol és n-hexán 10 : 1 arányú elegyéből átkristályosítva 78—79 °C-on olvadó színtelen, prizmaalakú kristályokat nyerünk. 2 G. W. Anderson et al., J. Amer. Chem. Soc. 86, 1839 (1964) 4. 6'-Karbobenzoxi-kanamicin A 42,5 g (90 millimól) szabad kanamicin A bázis 450 ml vízzel és 500 ml dimetil-formamiddal készült oldatát 0 °C alá hütjük, és erélyesen kevertetjük. Ehhez az oldathoz mintegy két óra alatt hozzácsepegtetjük 22,4 g (90 millimól) N-(benziloxi-karbonil)-oxi-szukcinimid 500 ml dimetil-formamiddal készült oldatát. Éjszakán át —10—0 °C közötti hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd még egy napig szobahőmérsékleten. Csökkentett nyomáson, kb. 50 °C alatti hőmérsékletöt ledesztilláljuk az elegyről az oldószereket. 500 ml víz és 500 ml butanol elegyében feloldjuk az olajos maradékot, az oldhatatlan részeket szűréssel eltávolítjuk, majd a két fázist elválasztjuk. A butanolos és a vizes fázist az ellenáramú megosztás technikája szerint butanollal telített vízzel (2x500 ml), ill. vízzel telített butanollal (2x 500 ml) kirázzuk. A három vizes részt egyesitjük, és csökkentett nyomáson szárazra desztilláljuk, ekkor olajos maradékot nyerünk, amelynek egy része szobahőmérsékleten való állás közben kikristályosodik. A kristályos részt tartalmazó desztillációs maradékhoz kb. 100 ml metanolt adunk, amely kioldja az olajos részeket és ily módon elkülöníti a kristályokat. Ezután hozzáadunk kb. 300 ml etanolt, éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk az elegyet, amely kristályos tömeggé dermed. A kristályokat kiszűrjük, a termék súlya 44 g. n-Propanol—piridin—ecetsav—víz 15 : 10 : 3 : 12 elegyben futtatott és ninhidrinnel előhívott vékonyréteg-kromatogram szerint a termék kis mennyiségű kanamicin A-t tartalmaz. A nyersterméket 300 ml vízben oldjuk, és egy 500 ml, NH4+-fázisú CG—50 típusú ioncserélő gyantával töltött, 30 mm átmérőjű oszlopon kromatografáljuk. 0,1 normál ammónium-hidroxid-oldattal mossuk az oszlopot, és 10 ml térfogatú eluálum-frakciókat szedünk. A kívánt termék 10—100. frakcióban jön le az oszlopról, a kanamicin A-t a lassabban vándorló frakciókból nyerhetjük ki, míg a termék helyzeti izomerje(i) a gyorsabban vándorló frakciókban van(nak). A 10—110. frakciót egyesítjük, és róluk csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 24,6 g (45%) színtelen 6'-karbobenzoxi-kanamicin A-t (II) (6'-Cbz-kanamicin A) nyerünk, amely 204 °C-nál kezd olvadni és elszíneződni, majd 212 °C-nál gázfejlődés közben bomlik. [»]D=106° (c=2, H20). Vékonyrétegkromatográfiás (szilikagéi F254; ninhidrin) futtatóelegy Rf-érték 6’—Cbz— kanamicin A Kanamicin A n-PropanoI—piridin—ecetsav—víz (15 : 10 : 3 : 12) 0,42'; 0,332; 0,152 0,04 Aceton—ecetsav—víz (20 : 6 : 74) Kloroform—metanol—tömény ammónium-hidroxid—víz 0,24 0,14 (1 : 4 : 2 : 1) Metil-acetát—n-propanol—tömény ammónium-hidroxid 0,76 0,50 (45 : 105 : 60) 0,223 0,043 1 Főfolt 2 Szennyezőfolt 3 Előhívás antron—kénsav eleggyel A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokhoz alkalmazott egyik futtatóelegyben futtatva a végtermék mellett még két kis mennyiségű komponenst találhatunk a végtermék mellett. A II általános képletű vegyületek előállítására azonban további tisztítás nélkül használjuk a terméket. 5. L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-vajsav előállítása ambutirozin A-ból, B-ből vagy ezek keverékéből 5,0 g ambutirozin A-t (3 541 078 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 1970. november 17.) 160 ml 0,5 normál nátriumhidroxid-oldattal egy órán át forralunk. 6 normál sósavval semlegesítjük a hidrolizátumot, majd egy NH4+-fázisú, CG—50 ioncserélő gyantával töltött oszlopon kromatografáljuk. Vízzel végzett elúció, majd a víznek liofilizálás útján való 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
