175550. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 2, 5-dihidro-1, 2-tiazino[5, 6-b] indol-3-karbonxamid- 1,1-dioxidok előállítására
7 175550 8 B 2,5-dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-N-(4-metil-2- -tiazolil)-1,2-tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-1,1- -dioxid; C 2,5-dihidro-2,5-dimetil-N-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-4- -hidroxi-1,2-tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-l, 1 - -dioxid ; D 2,5-dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-N-(6-metil-2- -piridil)-l ,2-tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-l, 1- -dioxid ; E 8-klôr-2,5-dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-N-(2--tiazolil)-1,2-tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-1,1- -dioxid; F 2,5-dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-8-metoxi-N-(2- -piridil)-1,2-tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-l, 1 - -dioxid ; G acetilszalicilsav (összehasonlító vegyület). A vegyületeknek kollagénnel kiváltott vérlemezkeaggregációra kifejtett gátló hatását, és néhányuk akut toxicitását vizsgáltuk. a) Bom-féle vizsgálat, kollagénnel kiváltott aggregáció A trombocita-aggregációt Bőm és Cross módszere 25 [J. Physiol. 170, 397 (1964)] szerint egészséges kísérleti személyek lemezkegazdag vérplazmájával vizsgáltuk. A vérlemezke-szuszpenzió optikai sűrűségének csökkenését kollagén hozzáadása után fotometriásan mértük és feljegyeztük. A sűrűség-görbe hajlásszögéből követkéz- 30 tettünk az aggrégáció sebességére. A görbének az a pontja, aminél legnagyobb a fényáteresztő képesség, szolgált az optikai sűrűség számításához. A kollagén mennyiségét úgy választottuk meg, hogy irreverzibilisen lefutó kontroli-görbét kapjunk. 35 A megadott számértékek az optikai sűrűségre vonatkoznak és a vizsgált vegyületek hatására bekövetkező fényáteresztő képesség százalékos változását (=az aggregáció százalékos csökkenése) jelentik a kontrolihoz viszonyítva. A kollagén a kereskedelemben hozzáférhető készítmény volt (Hormon-Chemie cég, München, NSZK). A kapott átlageredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. 1. táblázat Vegyület Koncentráció (mól/1) Aggrégáció csökkenése, % A 2 x 10-5 96 2xl0~6 81 B 2x 10“5 100 2xl0"6 97 2xHT7 42 C 2x 10-5 89 2xl0“6 82 D 5 x IO“5 86 5x 10~6 60 E 1 x 10-4 100 1 x 10-5 86 1 x 10~6 27 F 1x10 4 . 85 1 x 10~5 43 G >sszebasonlító 3xl0-5 : 45 egyület 1 X10-5 13 b) Akut toxicitás meghatározása Az akut toxicitást hím és nőstény egereken perorális úton határoztuk meg. A vegyületeket tilózban szuszpen- 5 dálva adtuk be. A 2. táblázatban adjuk meg az 1., 7. és 14. napon belül elpusztult állatokat. 2. táblázat Vegyület Adag (mg/kg) Állatok száma Elpusztult állatok száma 1. nap 7. nap 14 nap A 1000 10 0 0 0 B 1000 10 0 0 0 D 1000 10 0 0 0 E 1000 10 0 0 0 Az 1. táblázat eredményei azt mutatják, hogy az össze- 20 hasonlításul használt acetilszalicilsav az aggrégáció 50%-os csökkenését csak körülbelül 4 x 10~5 mól/liter koncentrációban biztosítja, viszont az A, B, C, D és E vegyületek az 50%-os csökkenés eléréséhez legalább egy vagy két nagyságrenddel kisebb koncentrációban elegendő. Például a B vegyület az aggregációt 50%-osan körülbelül 3 x 10~7 mól/liter koncentrációban csökkenti. A 2. táblázatból kitűnik, hogy az A, B, D és E vegyületek nagy adagban sem pusztították el az állatokat, így a vegyületeknek nagyon kedvező terápiás szélességük van. A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárást. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 1. példa 2,5-Dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-N-(2-tiazolil)-l,2- -tiazino[5,6-b]indol-3-karboxamid-1,1 -dioxid 40 3,2 g (10 mmól) 2,5-dihidro-2,5-dimetil-4-hidroxi-l,2- -tiazino[5,6-b]indol-3-karbonsav-metilészter-l,l-dioxidot és 1,2 g (12 mmól) 2-amino-tiazolt 150 ml xilolban 5 óra hosszat visszafolyatás közben nitrogénatmoszférában 45 melegítünk. A keletkező metanolt Soxhlet-feltétben elhelyezett 4 Á-ös molekulaszitával eltávolítjuk. Lehűtés és éjszakán át való állás után a keletkező kristályokat kiszűrjük és éterrel mossuk. 3,6 g (92%) 2,5-dihidro-2,5- -dimetil-4-hidroxi-N-(2-tiazolil)-l,2-tiazino[5,6-b]indol-3- 50 -karboxamid-l,l-dioxidot kapunk. Olvadáspontja bomlás közben 260—261°. ‘H-MMR spektruma ([D6]-DMSO-ban): 8=8,0- -7,1 (m, 6,6—H-tól 9—H-ig, 4 — H, 5'—H); 4,17 (s, 3, 5—CHS); 2,94 (s, 3, 2^-CH3). 55 A kiindulási vegyületeket a következő közbenső termékeken keresztül állítjuk elő: a) 3,4-Dihidro-4-metiI-3-oxo-2H-izotiazoIo[4,5-b]indol-2-ecetsa v-metilészter-1,1 -dioxid 60 4,6 g (0,2 gatom) nátriumnak 250 ml vízmentes metanollal készült oldatához hozzáadunk 53,66 g (0,2 mól) l-metil-3-szulfamoil-indol-2-karbonsav-metilésztert. A reakciókeveréket 1 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, majd lehűlés után a csapadékot leszívatjuk, 65 a szűredéket bepároljuk és a maradékot szintén leszívat-4
