175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
57 175306 58 ezután feloldjuk 150 ml dimetil-formamidban, majd az oldatot jeges hűtés közben trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 23,1 g Z-0—Ala— —ONB-t adunk, majd a keveréket egy éjszakán át keverjük. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a kapott maradékot feloldjuk 300 ml, kismennyiségü n-butanolt tartalmazó etil-acetátban. A kapott oldatot vízzel, majd háromszor 100 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül pedig háromszor 100 ml telített vizes nátrium-oldattal mossuk, ezután pedig vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a kapott maradékhoz dietilétert adunk. A kivált port kiszűrjük, majd etanol és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk. így 22,9 g (75%) mennyiségben a 97—99 °C olvadásponté cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aJo6,5 =-11,2° (c = 0,9, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C2iH3i08N7 képlet alapján: számított: C =49,50%, H =6,13%, N = 19,25%, talált: C =49,51%, H =6,06%, N = 18,93%. b) Z-0-Ala—Arg(N02 )-Gly-OH előállítása 50 ml aceton és 25 ml víz elegyében feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 12,1 g-ot, majd a kapott oldathoz jég és nátrium-klorid keverékével végzett hűtés közben cseppenként 30 perc leforgása alatt 27,8 ml 1 normál vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet ezután ugyanilyen körülmények között 1 órán át, majd szobahőmérsékleten további 2 órán át keverjük, ezt követően 3,8 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá, ezután pedig az acetont csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A kapott maradékhoz 50 ml vizet adunk, majd a vizes keveréket 6 normál sósavoldattal megsavanyítjuk, amikor is olajos anyag válik ki, amely hamarosan megszilárdul. Az így kapott szilárd terméket szűrés útján különítjük el. így 10,3 g (86%) mennyiségben a 101—103 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^6’5 = -10,2° (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C, <)H2 708N7-0,5H20 képlet alapján: számított: C =46,53%, H =5,75%, N = 19,99%, talált: C =46,28%, , H =5,41%, N =20,01%. c) Z-Phe-Tyr—OMe előállítása 100 ml tetrahidrofuránban 5,10 g Tyr-OMe-hidrokloridot szuszpendálunk, majd a szuszpenziót jeges hűtés közben 3,08 ml trietil-aminnal semlegesitjük. A szuszpenzióhoz ezután 5,99 g Z—Phe— 'OH-t, 3,94 g HONB-t és 4,54 g DCC-t adunk, majd a reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük. Ezután a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot 200 ml etil-acetáttal felvesszük. Az így kapott oldatot háromszor 100 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd háromszor 100 ml 1 normál sósavoldattal, végül pedig vízzel mossuk, ezt követően pedig vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Miután az etil-acetátot csökkentett nyomáson ledesztilláltuk, a maradékhoz petrolétert adunk, amikor is gélszerű csapadék válik ki, amelyet kiszűrünk, majd etil-acetát és petroléter elegyéből átcsapunk. így 6,0 g (63%) mennyiségben a 132—133°C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ö]q6,5 = 9,9° (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C27H2806N2 képlet alapján: számított: C =68,05%, N =5,88%, H =5,92%, talált: C =68,07%, N =5,95%. H =5,92%, d) Z-Phe-Tyr—NH2 előállítása 40 ml, ammóniával telített metanolban feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 3,0 g-ot, majd a kapott oldatot lezárt edényben egy héten át tároljuk, amikor is tűkristályok válnak ki. Miután az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtattuk, a maradékhoz dietilétert adunk és a képződött kristályokat szűréssel elkülönítjük, majd etanol és viz elegyéből átkristályosítjuk. így 2,61 g (90%) mennyiségben a 217-218 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ajp6’5 =—28,6° (c= 1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C26H2705N3 képlet alapján: számított: C =67,66%, H =5,90%, N =9,11%, talált: C =67,45%, H = 5,88%, N =9,05%. e) Z-Phe Phe Tyr-NH2 előállítása 1,15 g Z-Phe-Tyr-NH2-höz kismennyiségü anizolt. majd 11 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk. Miután a kapott elegyet szobahőmérsékleten 40 percen át ráztuk, dietilétert adunk hozzá. A képződött csapadékot kiszűrjük, majd szemcsés nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,67 g Z-Phe—OH-t és 0,45 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,52 g EÍCC-t adunk. A keveréket ezután szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. Az előző bekezdésben kapott csapadékot 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük és ezután hozzáadjuk az itt ismertetett módon előállított rcakcióképes észter oldatát. A reakció-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 29
