175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
59 175306 60 elegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A kivált kristályokat kiszűrjük, etil-acetáttal mossuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átkristályosít|uk. így 1,01 g (74%) mennyiségben a 218-221 C olvadáspontú (bomlik) cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége[a]t)6’S =-27,7° (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C35H3606N4 képlet alapján: számított: C =69,06%. H =5,96%, N =9,21%, talált: C =69,01%, H =6,02%, N =9,23%. 0 Z-ß-Ala-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe—Tyr—NH2 előállítása 30 ml metanol és 20 ml dimetil-formamid elegyében az e) lépésben kapott vegyületből 0,91 g-ot szuszpendálunk, majd a szuszpenzión hét órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A metanolt ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. 5 ml dimetil-formamidban feloldunk 0,72 g Z—ß—Ala-Arg(N02 )—Gly-OH-t és 0,32 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,37 g DCC-t adunk. A keveréket ezután 6 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez hozzáadjuk az előző bekezdésben kapott aminkomponenst. Az így kapott reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor is szilárd csapadékot kapunk, amelyet vízzel eldörzsölünk. Az így kivált port kiszűrjük, majd dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk, így 0,88 g (62%) mennyiségben a 174-177 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aj^ ,s =-15,0° (c = Ív dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C4 4 H5 s 011N11 • H2 O képlet alapján: számított: C = 57,79%, H =6,01 %, N = 16,12%, talált: C = 57,54%, H =6,18%, N = 16,21%. g) H-ß-Ala-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az f) lépésben kapott vegyületből 740 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva hidrogéngázt vezetünk át 7 órán keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot fel visszük egy 1,6 cm-szer 15 cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,005 normál és 700 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. Az 580 ml és 790 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd lioftlizáljuk. Így 540 mg (75%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége Md6 = -20,0° (c = 0,5, vízben). Elemzési eredmények a C3 8H5o07N10 • •2C2 H402 *3H20 képlet alapján: számított: C =54,06%, H =6,91%, N = 15,01%, talált: C = 54,20%, H = 6,50%, N = 14,99%. Aminosav-elemzés : Arg: 0,95 (1), Gly: 1,05 (1), Tyr: 1,01 (1), Phe: 2,00 (2), peptidtartalom 74%. h) H-ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 -dicitrát előállítása 20 ml vízben feloldunk a g) lépésben ismertetett módon előállítható vegyületből 9,33 g-oi, majd a kapott oldathoz keverés közben 2,2 g citromsav-monohidrátot adunk. A képződött kristályos csapadékot ezután kiszűrjük, majd kis mennyiségű hideg vízzel mossuk. így 10,4 g mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [o]p3 = -19,6° (c = 1, vízben). Elemzési eredmények a CjaHsoC^Nio■2C6H807 képlet alapján: számított: C =52,54%, H =5,82%, N = 12,25%, talált: C = 52,28%, H =5,87%, N = 12,46%, 38. példa H—ß—Abu—Arg—Gly—Phe —Phe—Ty r—NH2 előállítása a) Z-7-Abu-Arg(N02 )-Gly-OEt előállítása 4,38 g Z—Arg(N02 )—Gly-OEt-hez 40 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten 30 percen át rázzuk, ezután pedig dietilétert adunk hozzá. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ezután 30 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot jéggel végzett lehűtése után trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 4,16 g Z-7-Abu-0NB-t adunk, majd a reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz vizet adunk. A vizet ezt követően dekantáljuk, a maradékhoz pedig dietilétert adunk, amikor is az megszilárdul. Ezután kiszűrjük, majd acetonitrilből átkristályosítjuk. Így 2,5 g (48%) mennyiségben a 60—62 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“jn* = 1 1,1° (c = 1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C22H330gN7 képlet alapján: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 30
