175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
55 175306 56 elegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, alaposan szárítjuk, etil-acetáttal mossuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 0,82 g (78%) mennyiségben a 184—188°C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o3 =-19,5° (c = 1,1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C46HSsOi iNi i *H20 képlet alapján: számított: C =57,79%, H =6,01%, N = 16,21%, talált: C = 57,95%, H =5,91%, N = 16,19%. b) H—0,7—Dab—Arg—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 600 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 6 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot felvisszük egy 1,5 cm-szer 13 cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,1 normál és 700 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 610 ml és 680 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 255 mg (46%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ajjj= —12,5° (c = 0,8, vízben). Elemzési eredmények a C30H440sNi0- •3C2H4O2 *3H20 képlet alapján: számított: C =50,34%, H =7,28%, N = 16,31%, talált: C = 50,59%, H =7,61%, N = 16,93%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00, (1), Gly: 1,00 (1), Phe: 1,98 (2), a.y-Dab: 1,02 (1), peptidtartalom 72%. 36. példa H-Arg-Arg-Gly-Phe-Phe-NH; előállítása a) Z-Arg(N02)-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,80 g Z—ArgfNOíj-Gly—Phe—Phe-NH2-t ecetsavas hidrogén-bromid-oldattal kezelünk és 10 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,39 g Z-ArgfN02)-OH-t és 0,22 g 2,4-dinitro-fenolt, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,25 g DCC-t adunk. Az oldatot ezután 2 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez az előző bekezdésben kapott dimetil-formamidos oldatot hozzáadjuk. A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A kivált olajos terméket elkülönítése után vízzel alaposan mossuk, majd dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk, így 0,90 g (89%) mennyiségben a 89—92 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o3 =-17,6° (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C40H52 0„N,4 képlet alapján: számított: C = 52,05%, H = 5,90%, N = 21,25%, talált: C = 52,20%, H = 6,16%, N = 20,91% b) H—Arg— Arg-Gly—Phe— Phe-NH2 előállítása 40 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 700 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 9 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot felvisszük egy 3 cm-szer 18 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra. Az oszlopot 1 liter 0,005 normál és 1 liter 0,3 normál vizes ammnónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 890 ml és 1410 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 380 mg (45%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelyek fajlagos forgatóképessége [ajp2 =,+2,4° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavoldatban). Elemzési eredmények a •3C2H4 02 *1,5H2 0 képlet alapján: számított: C =51,40%, H =7,15%, N = 18,93%, talált: C =51,25%, H =7,29%, N = 19,08%. Aminosav-elemzés : Arg: 2,02 (2), Gly: 1,00 (1), Phe: 2,02 (2), peptidtartalom 73%. 37. példa H ß -Alá - Arg-Gly-Phe-Phe- Tyr-NH2 előállítása a) Z—ß—Alá - ArgfNOj )—Gly—OEt előállítása 26,3 g Z—Arg(N02 )—Gly—OEt-hoz hozzáadunk 130 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot, majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 60 percen át rázzuk, ezután pedig dietilétert adunk hozzá. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd szemcsés nátrium-hidroxid felett szárítjuk. A csapadékot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
