175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
49 175306 50 d) Z-/?-Ala-ONB előállítása 40 ml tetrahidrofuránban felölünk 3,35 g Z—/3— —Alá—OH-t és 3,23 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 3,71 g DCC-t adunk. 5 A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. A szűrletből az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz petrolétert adunk. A kivált kristályokat kiszűrjük, majd acetonitrilből átkristályosítjuk. Így 3,83 g (66,4%) mennyiségben a 125—126 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Elemzési eredmények a C2oH2o06N2 képlet alapján: számitott: C =62,49%, H =5,24%, N =7,29%, talált: C =62,52%, H =5,18%, N =7,29%. ségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^3,5 = -13,9° (c = 0,5 vizben). Elemzési eredmények a C29H4105N2* •2C2H402 • H20 képlet alapján: számított: C = 54,00%, H = 7,01%, N = 17,18%, 10 talált: C =53,75%, H =7,07%, N = 17,15%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00 (1), Gly: 1,00 (1), Phe: 2,00 (2), peptidtartalom 76% 15 [a gömbölyű zárójelben megadott számértékek teoretikus értékek, ezeket az értékeket a továbbiakban is megadjuk]. 20 31. példa e) Z-ß-Ala-Arg(N02 )-Gly-Phe-Phe-NH2 H-7-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-NH2 előállítása előállítása A c) lépésben kapott vegyületből 1,06 g-hoz 25 10 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd szobahőmérsékleten 40 percen át végzett rázás után a keverékhez dietilétert adunk. A kivált csapadékot kiszűrjük, csökkentett nyomáson szemcsés nátrium-hidroxid felett exszikkátorban 30 szárítjuk és végül 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk. Lehűtése után a kapott oldatot 0,84 ml trietil-aminnal semlegesítjük, majd 0,69 g Z—(?■— -Alá—ONB-t adunk hozzá. A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomá- 35 son bepároljuk és a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A kivált port kiszűrése után szárítjuk, etil-acetáttal mossuk, végül pedig víz, dioxán és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 0,98 g (83,3%) mennyiségben a 161 — 163 C olvadáspontú cím szerinti vegyületet 40 kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o1,s = —20,9° (c = 0,9, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C3 7H46O9N]O-0,5H2O képlet alapján: a) Z—7—Abu—ONB előállítása 40 ml tetrahidrofuránban feloldunk 4,75 g Z-7-Abu-OH-t, és 3,94 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 4,54 g DCC-t adunk. A kapott keveréket ezután 6 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. A szűrletből az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz először 30 ml dietilétert, ezután pedig kismennyiségű vizet adunk. A képződött kristályokat kiszűrjük. így 6,0 g (75,3%) mennyiségben a 66—69 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Elemzési eredmények a C21H2 2 06 N2 képlet alapján: számított: C =63,31%, H =5,57%, N = 7,03%, talált: C =63,39%, H =5,42%, N = 7,06%, számított: C =56,69%, H =6,04%, N = 17,89%, talált: C =56,84%, H =5,88%, N = 17,50%. 0 H-0-AÍa—Arg-Gly-Phe—Phe-NH2 előállítása 40 * * * * * * * * * * * 50 40 ml ecetsavban feloldunk az e) lépésben kapott vegyületből 800 mg-ot, majd a kapott oldaton 55 katalizátorként palládiumkormot használva 14 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot felvisszük egy-.5 cm-szer 9 cm méretű, karboximetil-sephadex 60 ©sántából készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml °-°l normál és 700 ml 1,0 normál vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. . ^®0tnl és 990 ml közötti frakciókat összeönt-Jük, majd liofilizáljuk. így 500 mg (66%) mennyi- 65 b) Z—7-Abu—Arg(N02 )—Gly—Phe-Phe—NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,53 g Z—Arg(N02 )—Gly—Phe-Phe—NH2 -t ecetsavas hidrogén-bromid-oldattal kezelünk és 15 ml dimetil-formamidban feloldunk. Miután az oldatot trietil-aminnal semlegesítettük, 0,44 g' Z-7-Abu-ONB-t adunk hozzá. A reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, alaposan szárítjuk, etil-acetáttal mossuk, végül pedig etanol és víz elegyéből átcsapjuk. így 0,38 g (657c) mennyiségben a 167-170 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ajp ,s =-21,2° (c = 1,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C38H4809Ni0-0,5H2O képlet alapján: 25
