175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
51 175306 52 számított: C =57,20/?, H -6,19',?, N = 17,56%, talált: C =57,14%, H =6,10%, N =17,56%. c) H—7—Abu—Arg—Gly—Phe—Phe—NH: előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk a b) lépésben kapott vegyületből 300 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 6 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Miután a katalizátort kiszűrtük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot felvisszük egy 1,8 cm-szer 10 cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 350 ml 0,005 normál és 350 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 290 ml és 340 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 180 mg (63%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [oJd* = -15,0° (c = 0,5, vízben). Elemzési eredmények a C30H43OsN9* • 2C2H4O2’1,5H20 képlet alapján: számított: C = 53,95%, H =7,19%, N = 16,66%, talált: C =53,93%, H =7,29%, N = 16,34%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00 (1), Gly: 1,00 (1), Phe: 1,94 (2), peptidtartalom 76%. 32. példa H-S -Aval-Arg-Gly-Phe-Phe-NHj előállítása a) Z-ő —Aval—Arg(N02 )-Gly-Phe-Phe-NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,80 g Z-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2-t ecetsavas hidrogén-bromid-oldattal kezelünk és 10 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,30 g Z-5- —Aval—OH-t és 0,24 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,27 g DCC-t adunk, a keveréket pedig ezután 3 órán át keverjük. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, majd a szűrlethez hozzáadjuk a fenti módon elkészített dimetil-formamidos oldatot, a kapott keveréket pedig egy éjszakán át keverjük. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a kapott maradékhoz vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, alaposan megszárítjuk, etil-acetáttal mossuk, végül pedig dimetü-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 0,62 g (70%) mennyiségben a 154-157 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a][>3 = -13,0° (c = l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C39H50O9N1 0’0,5H2O képlet alapján: számított: C = 57,69%’, H = 6,33%, N = 17.25%. talált: C = 57,84%, H =6,42%, N = 16,86%. b) H—5—Aval-Arg—Gly—Phe-Phe NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 500 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 5 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot felvisszük egy 1,8 cm-szer 9 cm méretű, karboximetil-sephadex-ből készült oszlopra. Az oszlopot 500 ml 0,1 normál és 500 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 290 ml és 370 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 290 mg (61%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o3=—12,6° (c = 0,5 vízben). Elemzési eredmények a C31H4S05N9’ •2C2H4O2 ’1,5H20 képlet alapján: számított: C = 54,53%, H = 7,32%, N = 16,36%, talált: C =54,34%, H =7,35%, N = 16,20%. Aminosav-elemzés: Arg: 1,11 (1), Gly: 1,00 (1), Phe: 2,04, (2), peptidtartalom 81,4%. 33. példa H—e—Acap—Arg—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása a) Z-e-Acap-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,84 g Z—Arg(N02 )—Gly—Phe—Phe—NH2 -t ecetsavas hidrogén-bromid-oldattal kezelünk és 10 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,32 g Z—e— -Acap-OH-t és 0,24 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,27 g DCC-t adunk. A keveréket ezután 3 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, a szűrlethez pedig hozzáadjuk a fenti módon elkészített dimetil-formamidos oldatot. A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A képződött port kiszűrjük, alaposan szárítjuk, etil-acetáttal mossuk,végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk. így 0,49 g (55%) mennyiségban a 102-104 *C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 26
