175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
39 175306 40 maradékhoz petrolétert adunk, majd a képződött port elkülönítjük. így 2,3 g (93%) mennyiségben a 64—67 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége Md = —75,58° (c = 0,995, metanolban). Elemzési eredmények a C35H55O10N5 képlet alapján: számított: C = 59,55%, H =7,85%, N = 9,92%, talált: C = 59,25%., H =7.99%, N =9,65%, d) Z—Phe—Phe—Tyr—Thr—Pro—Lys(BOC)— —Alá—OtBu előállítása 70 ml metanolban feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 1,41 g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 2 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűtjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, a kapott oldathoz pedig 1,1 g Z-Phe-Phe-Tyr-OH-t és 720 mg HONB-t adunk. A reakcióelegyhez jeges hűtés közben ezután még 618 mg DCC-t adunk, majd 20 órán át keverjük. Ezt követően az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz etil-acetát és dietiléter 1 : 1 arányú elegyét adjuk. A kivált port kiszűrjük, majd etanolból kristályosítjuk. így 2,1 g (100%) mennyiségben a 160— — 163,5 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]” =-63,73° (c = 1,05, metanolban). Elemzési eredmények a C62H8íO|6N8 képlet alapján: számított: C = 62,09%, H = 7,23%, N =9,34%, talált: C =62,02%, H = 7,14%, N =9,64%. e) Z—Arg(N02 )—Gly—Phe—Phe-Tyr-Thr— -Pro-Lys(BOC)—Alá—OtBu előállítása 30 30 ml metanolban feloldunk a d) lépésben kapott vegyületből 2,32 g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 3 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletből a metanolt ledesztilláljuk. A maradékot 5 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd az így kapott oldathoz 1,26 g Z-Arg(NOj )-Gly-ONB-t adunk és a kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük. Ezután a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, majd dimetil-formamid és víz elegyéből kétszer átcsapjuk. így 2,5 g (88%) mennyiségben a 138-141 °C (bomlik) olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [o]^4 =-32,4° (c = 0,99, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C7oH96Oi*Nm képlet alapján: számított: C =59,14%, H =6,81%, N = 13,80%, talált: C = 58,82%, H =6,80%, N = 13,66%, f) H-0-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr—Pro—Lys—Alá—OH előállítása Metanol és jégecet 2 : 1 arányú elegyéből 30 ml-ben feloldunk az e) lépésben kapott vegyületből 710mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 8 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 10 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot karboximetil-cellulózból készült, 130 ml térfogatú oszlopra felvisszük. Az oszlopot 800 ml 0,005 mólos és 800 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 913 ml és 1190 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk, amikor is 350 mg mennyiségben egy fehér pelyhes csapadékot kapunk. Ezt a csapadékot feloldjuk 8 ml dimetil-formamidban, majd a kapott oldathoz 41 mg p-toluol-szulfonsav-monohidrátot, ezután pedig 82 mg BOC—(3—Alá—ONB-t adunk, a képződött elegyet pedig 16 órán át keverjük. Ezután a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz 3 ml trifluorecetsavat adunk. A kapott elegyet 30 percen át rázzuk, majd a trifluorecetsavat ledesztilláljuk. A kapott maradékot 10 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot l,0cm-szer 10 cm méretű, Amberlite IRA—410 márkanevű gyantából (acetát formájú) készült oszlopon átbocsátjuk, amikor is a célterméket acetátjává konvertáljuk. Az eluátumot ezután lioftlizáljuk, majd 2,2 cm-szer 17 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot 500 ml 0,005 mólos és 500 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 430 ml és 500 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 250 mg mennyiségben fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^4 =-58,8° (c = 0,5, vízben). Aminosav-elemzés : Lys: 1,00, Arg: 1,04, Thr: 1,00, Pro: 1,04, Gly: 1,04, Alá: 1,04, Tyr: 0,89, Phe: 2,00, 13-Alá: 0,93 (peptidtartalom 72%). 21. példa H-Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys—Alá—OH előállítása A 20. példa 0 lépésében ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy BOC-0-Ala— —ONB helyett BOC—Gly—ONB-t használunk, amikor is 214 mg mennyiségben fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^3 = -59,2° (c = 0,4, vízben). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 20
