175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
175306 24 kiszüljük, majd dietilcterrel mossuk. Alapos szárítás után a csapadékot feloldjuk 10 ml dimetil-formamidban, majd jeges hűtés közben az így kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 336 mg. Z-0-Ala-ONB-t adunk, majd 18 órán át keverjük. Ezután a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A kivált csapadékot kiszűrjük, szárítjuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 560 mg mennyiségben (73%) a 200—202 °C (bomlik) olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége: [aß2 = -7,3° (c = 0,91, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C47H57O111 ’H^O képlet alapján: számított: C =58,19%, H = 6,13%^ N = 15,89%, talált: C =58,06%, H =6,41%, N = 15,57%. d) H-0-Ala-Arg-0-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 30 ml jégecetben feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 400 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 8 órán át hidrogéngázt vezetünk át. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 5 ml vízben feloldjuk, majd az így kapott oldatot felvisszük egy 2,6 cm-szer 22 cm méretű, karboximetil-cellulózzal töltött oszlopra. Az oszlopot ezután 700 ml 0,005 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal és 700 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 720 ml és 870 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így ~7f> mg mennyiségben (69,1%) fehér pelyhes csapaű«k formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aß2 = -17,2° (t = 0,53, vízben). Elemzési eredmények a C39H5207Nio-2C2 H4O2'3HjO képlet alapján: számított: C = 54,53%, H =7,03%, N = 14,79%, talált: C =54,52%, H=6,96%, N = 15,00%. Aminosav-elemzés: Arg: 1.00, Tyr: 1,00, Phe: 2,03, ß—Ala: 2,14 (peptidtartalom 79,0). 21 9. példa H-Ala-Arg-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NHi előállítása A 8. példa c) lépésében ismertetett módon járunk el, de Z-0-Ala-ONB helyett 340 mg Z—Alá—ONB*t használunk, majd végrehajtjuk a 8. példa d) lépését. így 297 mg mennyiségben fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aß4 = -18,9° (c = 0,62, vízben). Aminosav-elemzés: Arg: 1,02, Ala: 1,04, Tyr: 0,97, Phe: 2,00, ß—Ala: 0,97 (peptidtartalom 81.0%). 10. példa H-ß-Ala-Arg-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása. a) Z—Sár—Phe—Phe-Tyr—NH2 előállítása 30 ml dimetil-formamidban feloldunk 2,02 g Z—Phe—Phe—Tyr—NH2-t majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 5 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet lehűtjük. Ugyanekkor 10 ml tetrahidrofuránban feloldunk 810 mg Z—Sár—OH-t, majd a kapott oldathoz 0,71 g HONB-t adunk. Az elegyet ezután 0 °C-ra lehűtjük, majd. 0,82g DCC-t adunk hozzá. Az elegyet ezt követően 3 órán át keverjük, majd a kicsapódott diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletet hozzáadjuk a fenti dimetil-formamidos oldathoz. A reakcióelegyet ezután 20 órán át keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A képződött port kiszűrjük, majd dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 1,90 g (83,8%) mennyiségben a 246—248 C (bomlik) olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [aß3 =—9,7° (c = 1,07, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a CíghUi 07NS -0,51120 képlet alapján: számított: C =66,26%, H =6,15% N = 10,17%, talált: C =66,32%, H =6,39%, N = 10,52%. b) Z-Arg(N02)-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 10 ml dimetil-formamidban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből l,0g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 7 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet lehűtjük. Ugyanakkor 10 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,52 g Z—Arg(N02 )—OH-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,3 g 2,4-dinitro-fenolt és 0,33 g DCC-t adunk. A kapott keveréket 3 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletet hozzáadjuk a fenti dimetil-formamidos oldathoz. A reakcióelegyet ezután 20 órán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk, majd a képződött port kiszűrjük, szárítjuk és végül dimetil-formamid, etil-acetát és dietiléter elegyéből átcsapjuk. így • 1,04 g (77,2%) mennyiségben a 96—98 C olvadáspontú cím szerinti vegyületet 5 10 15 20 25 50 35 40 45 50 55 60 65 12
